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ISSN 1001-5256
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桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其机制

刘旭凌 杨广越 张玮 孙田甜 马文婷 吴柳 薛冬英 刘成 陶乐

刘旭凌,杨广越,张玮,等. 桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其机制[J]. 临床肝胆病杂志, 2021, 37(11): 2563-2568. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.11.016
引用本文: 刘旭凌,杨广越,张玮,等. 桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其机制[J]. 临床肝胆病杂志, 2021, 37(11): 2563-2568. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.11.016
LIU XL, YANG GY, ZHANG W, et al. Therapeutic effect of Taohong Siwu decoction on a mouse model of carbon tetrachloride-induced liver fibrosis and its mechanism[J]. J Clin Hepatol, 2021, 37(11): 2563-2568. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.11.016
Citation: LIU XL, YANG GY, ZHANG W, et al. Therapeutic effect of Taohong Siwu decoction on a mouse model of carbon tetrachloride-induced liver fibrosis and its mechanism[J]. J Clin Hepatol, 2021, 37(11): 2563-2568. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.11.016

桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其机制

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.11.016
基金项目: 

国家自然科学基金项目 81673788

国家自然科学基金项目 81873136

国家自然科学基金项目 81803898

国家自然科学基金项目 81803232

国家自然科学基金项目 82004106

上海市自然基金 20ZR1450300

上海市卫生健康委员会卫生行业临床研究专项 202040149

上海市普陀区自主创新项目 ptkwws201817

上海市普陀区自主创新项目 ptkwws201904

详细信息
    通讯作者:

    陶乐,talent901036@163.com

  • 中图分类号: R575.2

Therapeutic effect of Taohong Siwu decoction on a mouse model of carbon tetrachloride-induced liver fibrosis and its mechanism

Research funding: 

National Natural Science Foundation of China 81673788

National Natural Science Foundation of China 81873136

National Natural Science Foundation of China 81803898

National Natural Science Foundation of China 81803232

National Natural Science Foundation of China 82004106

Shanghai National Natural Science Foundation 20ZR1450300

Shanghai Municipal Health Commission 202040149

Indenpdent Innovation Project of Shanghai Puotuo District Project ptkwws201817

Indenpdent Innovation Project of Shanghai Puotuo District Project ptkwws201904

  • 摘要:   目的  探讨桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其作用机制。  方法  24只雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、模型组和桃红四物汤组,每组8只。模型组和桃红四物汤组小鼠腹腔注射10%CCl4,第3周开始给予桃红四物汤灌胃给药4周,检测肝功能(ALT、AST),观测肝组织病理形态学。实时荧光定量PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、透明质酸合成酶-2(HAS-2)、Ⅰ型胶原(Col1)mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测α-SMA、Col1及HAS-2蛋白的表达。分离小鼠原代肝星状细胞(HSC),应用siRNA沉默HAS-2,检测其对HSC激活的影响。计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组内进一步两两比较采用SNK或LSD-t检验。  结果  与正常组相比,模型组血清肝功能指标ALT、AST水平显著升高,桃红四物汤组小鼠血清ALT、AST水平均显著下降(P值均<0.01)。病理学染色显示:模型组炎症细胞浸润明显,增生的胶原纤维形成纤维间隔;桃红四物汤组胶原纤维间隔较疏松及炎症细胞浸润减轻。与模型组相比,桃红四物汤组α-SMA、Col1 mRNA和蛋白的表达水平均显著降低(P值均<0.001)。与正常组比较,模型组肝组织中HAS-2 mRNA表达水平显著升高(t=6.14,P<0.05),桃红四物汤组HAS-2蛋白表达水平(0.29±0.10)较模型组(1.00±0.12)明显减少(t=70.73,P<0.001)。siRNA沉默HAS-2,TGFβ处理后(Si HAS-2+TGFβ组)α-SMA、Col1 mRNA表达水平较NC+TGFβ组显著降低(P<0.01)。  结论  桃红四物汤通过抑制HAS-2对CCl4致小鼠纤维化有显著治疗作用。

     

  • 图  1  肝组织病理结果(×100)

    注:a,HE染色,×100;b,天狼星红染色,×100。

    图  2  各组小鼠肝组织α-SMA、Col1表达比较

    注:a,α-SMA免疫组化结果(×100);b,α-SMA、Col1免疫印迹结果。

    图  3  各组小鼠肝组织HAS-2表达比较

    注:a,HAS-2免疫组化结果(×100);b,HAS-2免疫印迹结果。

    表  1  RT-PCR引物序列

    名称 序列
    18S RNA 上游引物:5′-GTAACCCGTTGAACCCCATT-3′
    下游引物:5′-CCATCCAATCGGTAGTAGCG-3′
    Col1 上游引物:5′-TAGGCCATTGTGTATGCAGC-3′
    下游引物:5′-ACATGTTCAGCTTTGTGGACC-3′
    α-SMA 上游引物:5′-GTTCAGTGGTGCCTCTGTCA-3′
    下游引物:5′-ACTGGGACGACATGGAAAAG-3′
    HAS-1 上游引物:5′-CTATGCTACCAAGTATACCTCG-3′
    下游引物:5′-TCTCGGAAGTAAGATTTGGAC-3′
    HAS-2 上游引物:5′-TGAACAAAACGGTAGCAATCTG-3′
    下游引物:5′-ACTTTAATCCCAGGGTAGGTCAG-3′
    HAS-3 上游引物:5′-GATGTCCAAATCCTCAACAAG-3′
    下游引物:5′-CCCACTAATACATTGCACAC-3′
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    表  2  各组血清转氨酶水平及病理学改变

    指标 正常组(n=8) 模型组(n=8) 桃红四物汤组(n=8) F P
    ALT(U/L) 6.61±1.92 247.33±21.761) 144.84±15.942) 10.75 <0.001
    AST(U/L) 8.41±3.48 173.44±31.231) 108.05±18.452) 5.10 <0.001
    炎性细胞面积(%) 2.76±0.98 12.37±1.091) 6.58±0.722) 12.52 <0.001
    天狼星红面积(%) 1.20±0.35 10.80±2.491) 5.62±4.312) 5.50 <0.001
    注:1)与正常组比较,P<0.01;2)与模型组比较,P<0.01。
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    表  3  各组α-SMA、Col1表达水平比较

    指标 正常组(n=8) 模型组(n=8) 桃红四物汤组(n=8) F P
    免疫印迹
        α-SMA/GADPH 1.00±0.12 10.79±0.471) 4.34±1.042) 169.96 <0.001
        Col1/GADPH 1.00±0.54 7.56±0.961) 3.67±1.202) 36.98 <0.001
    RT-PCR
        α-SMA mRNA 1.00±0.28 5.50±1.741) 3.12±0.702) 33.73 <0.001
        Col1 mRNA 1.00±0.44 4.63±1.541) 2.98±1.292) 18.80 <0.001
    注:1)与正常组比较,P<0.01;2)与模型组比较,P<0.01。
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    表  4  各组HAS-1、HAS-2、HAS-3mRNA表达情况

    指标 正常组 模型组 t P
    HAS-1 1.00±0.19 1.22±0.49 1.46 0.247
    HAS-2 1.00±0.04 2.59±0.17 6.14 0.027
    HAS-3 1.00±0.24 0.97±0.31 0.00 0.962
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    表  5  α-SMA、Col1、HAS-2mRNA在原代HSC中的表达水平

    指标 对照组 TGFβ处理组 t P
    α-SMA mRNA 1.00±0.53 50.59±6.28 -11.165 0.008
    Col1 mRNA 1.00±0.63 30.39±1.49 -27.73 0.001
    HAS-2 mRNA 1.00±0.47 9.72±0.64 -19.36 0.003
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    表  6  基因沉默HAS2检测THSWD对HSC活化的影响

    组别 α-SMA mRNA Col1 mRNA
    NC 1.00±0.14 1.00±0.92
    NC+TGFβ 52.98±4.891) 30.28±0.421)
    NC+TGFβ+THSWD 30.31±0.612) 18.33±0.902)
    Si HAS-2 0.90±0.077 1.53±0.24
    Si HAS-2+TGFβ 25.11±2.512) 19.09±2.352)
    Si HAS-2+TGFβ+THSWD 24.44±1.05 20.68±2.08
    F 146.12 151.59
    P <0.001 <0.001
    注:NC,空白对照;1)与NC比较,P<0.01;2)与NC+TGFβ,比较P<0.01。
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出版历程
  • 收稿日期:  2021-03-09
  • 录用日期:  2021-04-21
  • 出版日期:  2021-11-20
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