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过表达HBx的肝细胞对肝星状细胞增殖和活化的影响及其机制

任婷玉 聂赫中容 肖利佳 林芳楠 王大明 宋春丽 周义文

引用本文:
Citation:

过表达HBx的肝细胞对肝星状细胞增殖和活化的影响及其机制

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.07.017
基金项目: 

国家自然科学基金面上项目 (81974457)

国家自然科学青年基金项目 (81702088)

广东省自然科学基金项目 (2018A030313740)

广东省自然科学基金项目 (2018A030310446)

广东省自然科学基金项目 (2019A1515012079)

广东省医学科学技术研究基金项目 (B2018013)

南方医科大学深圳医院苗苗计划项目 (2018MM02)

深圳市宝安区科技计划基础研究项目 (2019JD443)

利益冲突声明:本研究不存在研究者、伦理委员会成员、受试者监护人以及与公开研究成果有关的利益冲突。
作者贡献声明:任婷玉负责课题设计,资料统计分析,撰写论文;聂赫中容负责论文实验方法整理;肖利佳负责实验思路指导,修改论文;林芳楠负责论文实验材料整理;王大明负责收集临床样本及医学伦理申请; 宋春丽负责临床样本指标检测及论文数据核对; 周义文负责拟定写作思路,指导撰写文章并最后定稿。
详细信息
    通信作者:

    周义文,yiwenzhou21@aliyun.com

  • 中图分类号: R512.6;R575.2

Effect of hepatitis B x gene-overexpressed hepatocytes on the proliferation and activation of hepatic stellate cells and related mechanism

Research funding: 

National Natural Science Foundation of China (81974457);

National Natural Science Foundation of China (81702088);

Natural Science Foundation of Guangdong Province (2018A030313740);

Natural Science Foundation of Guangdong Province (2018A030310446);

Natural Science Foundation of Guangdong Province (2019A1515012079);

Medical Scientific Research Foundation of Guangdong Province (B2018013);

Seeding Program of Shenzhen Hospital of Southern Medical University (2018MM02);

Research Fund of Innovation and Technology Bureau of Baoan District (2019JD443)

  • 摘要:   目的  探讨HBV感染对肝星状细胞(HSC)活化的影响及作用机制。  方法  收集2020年11月—2021年1月慢性乙型肝炎患者血浆30份、乙型肝炎肝硬化患者血浆42份、肝细胞癌患者血浆30份及健康体检者(健康对照组)的血浆18份,ELISA法检测血浆和条件培养液中HBx、TGFβ1、多巴胺β羟化酶(DBH)和羟脯氨酸(Hyp)的含量。采用LO2细胞构建过表达HBx稳转株细胞, LO2细胞分为LO2-HBx组(稳定表达HBx)、阴性对照组(LO2-con)、空白组,分别制备LO2-HBx、LO2-con和LO2细胞(Mock)的条件培养基,孵育人HSC株LX-2,分为LX-2/LO2-HBx、LX-2/LO2-con、LX-2/Mock 3组,采用CCK-8法检测各组细胞增殖变化。采用rhTGFβ1刺激LX-2细胞,另采用TGFβ1受体抑制剂处理LX-2/LO2-HBx组细胞。荧光定量PCR或Western Blot法检测LO2细胞中的HBx及上述LX-2细胞中α-SMA、Col1A1、DBH和TGFβ1的表达。多组间比较采用单因素方差分析,进一步比较方法采用Bonferroni法;2组间比较采用t检验;相关性分析采用Pearson法。  结果  LO2-HBx可稳定表达HBx蛋白,其培养上清中TGFβ1含量升高(F=324.701,P<0.01);共培养LX-2/LO2-HBx组细胞发生明显细胞形态变化,出现细胞收缩,胞突明显伸长,胞内脂滴减少,与LX-2/LO2-con组比较其增殖活力明显增强(P<0.05),且α-SMA和Col1A1的mRNA(F值分别为144.712和76.680,P值均<0.01)及蛋白(F值分别为234.142和528.708,P值均<0.001)表达水平升高;LX-2/LO2-HBx组细胞中TGFβ1 mRNA(F=29.382, P<0.01)及DBH mRNA水平升高(F=42.662, P<0.01)。随着rhTGFβ1刺激浓度的增加,LX-2细胞中α-SMA(F=1 794.031,P<0.01)、Col1A1(F=91.340,P<0.01)及DBH(F=2 501.011,P<0.01)表达增加,在rhTGFβ1 10 ng/ml时达到峰值。在LO2-HBx组条件培养液中加入TGFβ1受体抑制剂后LX-2细胞中DBH和Col1A1的表达较对照组下调(t值分别为3.603、5.798,P值均<0.05)。慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝细胞癌患者的血浆TGFβ1(F=51.188,P<0.001)、HBx(F=39.227,P<0.001)、DBH(F=34.431,P<0.001)及Hyp(F=16.211,P<0.001)较健康对照组升高,血浆中HBx与TGFβ1、TGFβ1与DBH、Hyp与DBH的表达量呈正相关,r分别为0.931、0.863、0.765(P值均<0.001)。  结论  HBx蛋白可促进LO2细胞分泌TGFβ1,诱导LX-2的增殖和活化,促进肝纤维化的发生,并上调LX-2细胞中TGFβ1及DBH的表达;rhTGFβ1刺激可诱导LX-2活化和DBH表达上调。

     

  • 图  1  Western Blot检测3组LO2肝细胞系中HBx蛋白的表达量

    图  2  3组条件培养基培养的LX-2细胞培养48 h后形态及α-SMA和Col1A1表达变化

    注:a,LX-2细胞形态变化;b,α-SMA和Col1A1mRNA表达变化;c,α-SMA和Col1A1蛋白表达变化。

    图  3  CCK-8检测3组条件培养基培养的LX-2细胞的增殖活力

    注:与LX-2/LO2-con组比较,*P<0.05。

    图  4  条件培养基中TGFβ1的含量及条件培养后LX-2细胞中TGFβ1及DBH表达变化

    注:a,3组条件培养液中TGFβ1含量检测;b、c,条件培养液培养后LX-2细胞中TGFβ1及DBH mRNA表达变化。

    图  5  加入TGFβ1受体抑制剂处理后LX-2/LO2-HBx组细胞Col1A1及DBH的mRNA表达变化

    图  6  rhTGFβ1刺激LX-2细胞后α-SMA、Col1A1、DBH的mRNA表达变化

    图  7  临床样本中HBx、TGFβ1、Hyp及DBH相关性分析

    表  1  ELISA检测4组临床样本中HBx、TGFβ1、Hyp及DBH含量

    组别 例数 HBx(ng/ml) TGFβ1(pg/ml) Hyp(μmol/L) DBH(ng/ml)
    健康对照组 18 0.86±0.37 16.01±6.32 201.87±95.64 50.87±20.83
    慢性乙型肝炎组 30 26.41±9.161) 471.00±176.011) 591.53±216.401) 365.44±130.621)
    乙型肝炎肝硬化组 42 17.87±7.151)2) 500.94±157.621) 652.83±236.171) 378.66±127.131)
    肝细胞癌组 30 23.34±9.491) 513.09±163.841) 560.29±195.701) 349.00±138.531)
    F 39.227 51.188 16.211 34.431
    P <0.001 <0.001 <0.001 <0.001
    注: 与对照组比较,1)P<0.01, 与慢性乙型肝炎组比较,2)P<0.05。
    下载: 导出CSV
  • [1] VITTAL A, GHANY MG. WHO guidelines for prevention, care and treatment of individuals infected with HBV: A US perspective[J]. Clin Liver Dis, 2019, 23(3): 417-432. DOI: 10.1016/j.cld.2019.04.008.
    [2] WANG M, XI D, NING Q. Virus-induced hepatocellular carcinoma with special emphasis on HBV[J]. Hepatol Int, 2017, 11(2): 171-180. DOI: 10.1007/s12072-016-9779-5.
    [3] BAGLIERI J, BRENNER DA, KISSELEVA T. The Role of fibrosis and liver-associated fibroblasts in the pathogenesis of hepatocellular carcinoma[J]. Int J Mol Sci, 2019, 20(7). DOI: 10.3390/ijms20071723.
    [4] ZHU J, LUO Z, PAN Y, et al. H19/miR-148a/USP4 axis facilitates liver fibrosis by enhancing TGF-β signaling in both hepatic stellate cells and hepatocytes[J]. J Cell Physiol, 2019, 234(6): 9698-9710. DOI: 10.1002/jcp.27656.
    [5] XU Y, ZHANG DQ, CHEN JM, et al. Effect of various cells on the activation of hepatic stellate cells in liver microenvironment[J]. J Clin Hepatol, 2019, 35(2): 424-430. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2019.02.042.

    徐莹, 张定棋, 陈佳美, 等. 肝脏微环境中各种细胞对肝星状细胞活化的影响[J]. 临床肝胆病杂志, 2019, 35(2): 424-430. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2019.02.042.
    [6] EL-SERAG HB, MARRERO JA, RUDOLPH L, et al. Diagnosis and treatment of hepatocellular carcinoma[J]. Gastroenterology, 2008, 134(6): 1752-1763. DOI: 10.1053/j.gastro.2008.02.090.
    [7] REN CZ, HAO LS. Signal transduction involved in activation of hepatic stellate cells[J]. J Clin Hepatol, 2015, 31(3): 452-456. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2015.03.034.

    任昌镇, 郝礼森. 肝星状细胞活化过程中的信号转导[J]. 临床肝胆病志, 2015, 31(3): 452-456. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2015.03.034.
    [8] WEN X, HUAN H, WANG X, et al. Sympathetic neurotransmitters promote the process of recellularization in decellularized liver matrix via activating the IL-6/Stat3 pathway[J]. Biomed Mater, 2016, 11(6): 065007. DOI: 10.1088/1748-6041/11/6/065007.
    [9] HUAN HB, WEN XD, CHEN XJ, et al. Sympathetic nervous system promotes hepatocarcinogenesis by modulating inflammation through activation of alpha1-adrenergic receptors of Kupffer cells[J]. Brain Behav Immun, 2017, 59: 118-134. DOI: 10.1016/j.bbi.2016.08.016.
    [10] KAMIMURA K, INOUE R, NAGOYA T, et al. Autonomic nervous system network and liver regeneration[J]. World J Gastroenterol, 2018, 24(15): 1616-1621. DOI: 10.3748/wjg.v24.i15.1616.
    [11] WANG L, ZHU L, WU K, et al. Mitochondrial general control of amino acid synthesis 5 like 1 regulates glutaminolysis, mammalian target of rapamycin complex 1 activity, and murine liver regeneration[J]. Hepatology, 2020, 71(2): 643-657. DOI: 10.1002/hep.30876.
    [12] OBEN JA, ROSKAMS T, YANG S, et al. Hepatic fibrogenesis requires sympathetic neurotransmitters[J]. Gut, 2004, 53(3): 438-445. DOI: 10.1136/gut.2003.026658.
    [13] COLL M, GENESCÀ J, RAURELL I, et al. Down-regulation of genes related to the adrenergic system may contribute to splanchnic vasodilation in rat portal hypertension[J]. J Hepatol, 2008, 49(1): 43-51. DOI: 10.1016/j.jhep.2008.03.015.
    [14] LI P, WU G. Roles of dietary glycine, proline, and hydroxyproline in collagen synthesis and animal growth[J]. Amino Acids, 2018, 50(1): 29-38. DOI: 10.1007/s00726-017-2490-6.
    [15] SRIVASTAVA AK, KHARE P, NAGAR HK, et al. Hydroxyproline: A potential biochemical marker and its role in the pathogenesis of different diseases[J]. Curr Protein Pept Sci, 2016, 17(6): 596-602. DOI: 10.2174/1389203717666151201192247.
    [16] SHIN SK, KIM KO, KIM SH, et al. Exogenous 8-hydroxydeoxyguanosine ameliorates liver fibrosis through the inhibition of Rac1-NADPH oxidase signaling[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2020, 35(6): 1078-1087. DOI: 10.1111/jgh.14979.
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出版历程
  • 收稿日期:  2021-02-01
  • 录用日期:  2021-03-24
  • 出版日期:  2021-07-20
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