留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

阿米替林对非酒精性脂肪性肝病细胞模型脂质沉积及生化代谢的影响

刘勤 张强 吴方雄 闫蓉 李蓉 王佳 牛春燕

刘勤, 张强, 吴方雄, 等. 阿米替林对非酒精性脂肪性肝病细胞模型脂质沉积及生化代谢的影响[J]. 临床肝胆病杂志, 2021, 37(1): 99-104. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.01.020
引用本文: 刘勤, 张强, 吴方雄, 等. 阿米替林对非酒精性脂肪性肝病细胞模型脂质沉积及生化代谢的影响[J]. 临床肝胆病杂志, 2021, 37(1): 99-104. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.01.020
LIU Q, ZHANG Q, WU FX, et al. Effect of amitriptyline on lipid deposition and biochemical metabolism in a cell model of nonalcoholic fatty liver disease[J]. J Clin Hepatol, 2021, 37(1): 99-104. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.01.020
Citation: LIU Q, ZHANG Q, WU FX, et al. Effect of amitriptyline on lipid deposition and biochemical metabolism in a cell model of nonalcoholic fatty liver disease[J]. J Clin Hepatol, 2021, 37(1): 99-104. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.01.020

阿米替林对非酒精性脂肪性肝病细胞模型脂质沉积及生化代谢的影响

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.01.020
基金项目: 

陕西省科技厅重点研发计划 2017SF-274

详细信息
    作者简介:

    刘勤(1995—),女,主要从事肝脏疾病方面的研究

    通讯作者:

    牛春燕,415606772@qq.com

  • 利益冲突声明:本研究不存在研究者、伦理委员会成员、受试者监护人以及与公开研究成果有关的利益冲突,特此声明。
  • 作者贡献声明:刘勤负责课题设计与实验实施,资料收集整理,数据分析,撰写论文;张强参与实验实施,资料收集整理;李蓉负责实验质量控制及论文修改;吴方雄、闫蓉、王佳负责文献收集与整理;牛春燕进行课题设计,审核论文,并对论文负责。
  • 西安医学院第一附属医院与南京市溧水区人民医院(东南大学附属中大医院溧水分院)为共同第一通信单位
  • 中图分类号: R575.5

Effect of amitriptyline on lipid deposition and biochemical metabolism in a cell model of nonalcoholic fatty liver disease

  • 摘要:   目的  探讨阿米替林通过调节酸性鞘磷脂酶(ASM)/神经酰胺(CE)通路对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型脂质及生化代谢的影响。  方法  体外培养HepG2和L02细胞构建NAFLD细胞模型,MTT比色法测定细胞增殖率,油红O染色观察细胞内脂滴变化。实验分组:正常对照组、模型组、Ami组、TNFα组、Ami+TNFα组。全自动生化分析仪检测细胞内TG、TC及细胞上清液ALT、AST水平,ELISA法检测细胞内总的CE、ASM水平,Western Blot检测细胞内ASM蛋白的表达;实时荧光定量PCR检测细胞内ASM mRNA水平的表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Turkey检验。  结果  与正常对照组相比,NAFLD模型组ASM蛋白和mRNA表达量以及CE、TG、TC、ALT、AST水平明显升高(P值均<0.05);与模型组相比,Ami组ASM蛋白和mRNA表达量以及CE、TG、TC、ALT、AST水平明显降低(P值均<0.05),TNFα组ASM蛋白和mRNA表达量以及CE、TG、ALT、AST水平明显升高(P值均<0.05);与TNFα组比较,Ami+TNFα组ASM蛋白和mRNA表达量以及CE、TG、TC、ALT、AST水平明显降低(P值均<0.05)。  结论  ASM/CE通路促进脂质积聚、导致脂肪变,阿米替林可通过抑制该通路改善NAFLD肝细胞的脂质沉积。
  • 图  1  油红O染色结果(×200)

    图  2  不同浓度Ami干预HepG2和L02细胞的油红O染色结果(×200)

    图  3  各组细胞ASM蛋白的表达水平

    表  1  不同浓度FFA干预细胞的OD值和细胞增殖率

    FFA浓度(mmol/L) HepG2 L02
    OD值 增殖率(%) OD值 增殖率(%)
    0 0.755±0.038 100.00 0.861±0.046 100.00
    0.125 0.744±0.038 98.45 0.872±0.028 101.37
    0.25 0.727±0.030 95.90 0.838±0.027 97.05
    0.5 0.676±0.038 88.20 0.839±0.032 97.17
    1 0.645±0.0441) 83.60 0.729±0.033 91.05
    2 0.561±0.0121) 71.00 0.740±0.0251) 84.38
    F 13.472 6.930
    P <0.05 <0.05
    注:1)与空白组比较,P<0.05。
    下载: 导出CSV

    表  2  正常对照组和NAFLD模型组细胞内TG、TC、FFA含量比较

    组别 HepG2 L02
    TG(mmol/g prot) TC(mmol/g prot) FFA(mmol/g prot) TG(mmol/g prot) TC(mmol/g prot) FFA(mmol/g prot)
    正常对照组 0.142±0.011 0.171±0.033 55.009±6.285 0.117±0.013 0.151±0.018 44.906±4.881
    NAFLD模型组 0.541±0.056 0.633±0.045 224.585±25.600 0.370±0.055 0.458±0.052 196.491±14.846
    t 10.398 10.749 9.215 6.64 8.799 15.362
    P 0.009 0.009 0.012 0.022 0.013 0.004
    下载: 导出CSV

    表  3  不同浓度阿米替林干预脂肪变细胞的OD值和增殖率

    组别 HepG2 L02
    OD值 增殖率(%) OD值 增殖率(%)
    正常对照组 0.814±0.045 100.00 0.950±0.027 100.00
    NAFLD模型组 0.727±0.040 88.11 0.892±0.043 93.34
    Ami 25 μmol/L 0.741±0.040 90.08 0.887±0.026 92.80
    Ami 50 μmol/L 0.755±0.036 91.91 0.907±0.031 95.07
    Ami 100 μmol/L 0.778±0.040 95.06 0.930±0.023 97.73
    F 2.139 2.188
    P >0.05 >0.05
    下载: 导出CSV

    表  4  各组HepG2细胞内TG、TC、FFA水平比较

    组别 TG(mmol/g prot) TC(mmol/g prot) FFA(mmol/g prot)
    正常对照组 0.153±0.010 0.170±0.012 65.350±11.407
    NAFLD模型组 0.566±0.0301) 0.631±0.0431) 266.266±18.1121)
    Ami 25 mmol/L 0.553±0.029 0.622±0.020 268.887±8.053
    Ami 50 mmol/L 0.362±0.0542) 0.506±0.0422) 204.097±11.2802)
    Ami 100 mmol/L 0.233±0.0202) 0.342±0.0242) 166.003±12.8372)
    F 99.124 124.967 125.931
    P <0.05 <0.05 <0.05
    注:1)与正常对照组比较,P<0.05;2)与NAFLD模型组比较,P<0.05。
    下载: 导出CSV

    表  5  各组L02细胞内TG、TC、FFA水平比较

    组别 TG(mmol/g prot) TC(mmol/g prot) FFA(mmol/g prot)
    正常对照组 0.127±0.015 0.139±0.012 48.600±6.942
    NAFLD模型组 0.384±0.0301) 0.504±0.0441) 212.226±13.0891)
    Ami 25 mmol/L 0.363±0.016 0.458±0.016 210.774±14.166
    Ami 50 mmol/L 0.254±0.0192) 0.380±0.0262) 152.150±8.9002)
    Ami 100 mmol/L 0.205±0.0302) 0.282±0.0252) 122.543±11.2842)
    F 66.778 90.103 111.315
    P <0.05 <0.05 <0.05
    注:1)与正常对照组比较,P<0.05;2)与NAFLD模型组比较,P<0.05。
    下载: 导出CSV

    表  6  各组细胞ASM的mRNA相对表达量

    组别 HepG2 L02
    正常对照组 1 1
    NAFLD模型组 2.069±0.1241) 1.847±0.3861)
    Ami组 1.462±0.3792) 1.321±0.364
    TNFα组 2.685±0.3672) 2.708±0.1952)
    Ami+TNFα组 1.888±0.4933) 1.754±0.3733)
    F 11.28 13.653
    P <0.05 <0.05
    注:1)与正常对照组比较,P<0.05;2)与NAFLD模型组比较,P<0.05;3)与TNFα组比较,P<0.05。
    下载: 导出CSV

    表  7  各组细胞的ELISA检测结果(OD值)

    组别 HepG2 L02
    ASM CE ASM CE
    正常对照组 0.338±0.004 0.104±0.003 0.312±0.005 0.100±0.002
    NAFLD模型组 0.667±0.0131) 0.174±0.0031) 0.571±0.0031) 0.157±0.0031)
    Ami组 0.343±0.0062) 0.116±0.0062) 0.331±0.0052) 0.114±0.0052)
    TNFα组 0.791±0.0042) 0.220±0.0042) 0.670±0.0022) 0.187±0.0042)
    Ami+TNFα组 0.453±0.0033) 0.130±0.0033) 0.393±0.0043) 0.120±0.0073)
    F 2594.967 450.127 5098.961 194.498
    P <0.05 <0.05 <0.05 <0.05
    注:1)与正常对照组比较,P<0.05;2)与NAFLD模型组比较,P<0.05;3)与TNFα组比较,P<0.05。
    下载: 导出CSV

    表  8  各组HepG2细胞的生化指标比较

    组别 TG(mmol/g prot) TC(mmol/g prot) FFA(mmol/g prot) ALT(U/L) AST(U/L)
    正常对照组 0.159±0.022 0.169±0.013 63.498±6.788 7.701±0.516 6.379±0.865
    NAFLD模型组 0.534±0.0711) 0.640±0.0681) 255.506±28.8821) 28.566±2.7211) 23.558±4.0831)
    Ami组 0.209±0.2172) 0.194±0.0212) 123.956±12.2642) 9.247±1.5132) 8.068±1.6232)
    TNFα组 0.720±0.0552) 0.729±0.033 302.303±17.7382) 34.552±3.9052) 29.409±3.0222)
    Ami+TNFα组 0.262±0.0413) 0.303±0.0663) 166.610±17.6083) 14.604±3.5073) 10.272±1.6863)
    F 80.053 95.042 85.008 57.547 49.669
    P <0.05 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05
    注:1)与正常对照组比较,P<0.05;2)与NAFLD模型组比较,P<0.05;3)与TNFα组比较,P<0.05。
    下载: 导出CSV

    表  9  各组L02细胞的生化指标比较

    组别 TG(mmol/g prot) TC(mmol/g prot) FFA(mmol/g prot) ALT(U/L) AST(U/L)
    正常对照组 0.130±0.015 0.141±0.011 50.665±5.181 6.154±0.757 7.131±0.948
    NAFLD模型组 0.402±0.0401) 0.503±0.0301) 211.240±17.3701) 12.201±3.1561) 18.214±2.1531)
    Ami组 0.157±0.0202) 0.171±0.0182) 106.681±11.5492) 6.231±0.8572) 8.274±1.4392)
    TNFα组 0.553±0.0382) 0.615±0.0642) 271.230±12.7982) 18.152±1.8062) 25.549±2.9922)
    Ami+TNFα组 0.213±0.0233) 0.234±0.0253) 145.189±18.3773) 7.917±1.5383) 9.271±1.6943)
    F 116.301 113.124 116.704 23.211 48.842
    P <0.05 <0.05 <0.05 <0.05 <0.05
    注:1)与正常对照组比较,P<0.05;2)与NAFLD模型组比较,P<0.05;3)与TNFα组比较,P<0.05。
    下载: 导出CSV
  • [1] MUNDI MS, VELAPATI S, PATEL J, et al. Evolution of NAFLD and its management[J]. Nutr Clin Pract, 2020, 35(1): 72-84. DOI: 10.1002/ncp.10449
    [2] JIANG YZ, NIE HM, WANG R. Research advances in the pathogenesis of nonalcoholic fatty liver disease[J]. J Clin Hepatol, 2019, 35(11): 2588-2591. (in Chinese) DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2019.11.044

    姜煜资, 聂红明, 汪蓉. 非酒精性脂肪性肝病的发病机制[J]. 临床肝胆病杂志, 2019, 35(11): 2588-2591. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2019.11.044
    [3] BECKMANN N, SHARMA D, GULBINS E, et al. Inhibition of acid sphingomyelinase by tricyclic antidepressants and analogons[J]. Front Physiol, 2014, 5: 331. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25228885
    [4] YANG L, JIN GH, ZHOU JY. The role of ceramide in the pathogenesis of alcoholic liver disease[J]. Alcohol Alcohol, 2016, 51(3): 251-257. DOI: 10.1093/alcalc/agv119
    [5] RÉGNIER M, POLIZZI A, GUILLOU H, et al. Sphingolipid metabolism in non-alcoholic fatty liver diseases[J]. Biochimie, 2019, 159: 9-22. DOI: 10.1016/j.biochi.2018.07.021
    [6] UNGER RH. Lipotoxic diseases[J]. Annu Rev Med, 2002, 53(4): 319-336.
    [7] MALDONADO-HERNÁNDEZ J, SALDAÑA-DÁVILA GE, PIÑA-AGUERO MI, et al. Association between plasmatic ceramides profile and AST/ALT Ratio: C14:0 ceramide as predictor of hepatic steatosis in adolescents independently of obesity[J]. Can J Gastroenterol Hepatol, 2017, 2017: 3689375.
    [8] APOSTOLOPOULOU M, GORDILLO R, KOLIAKI C, et al. Specific hepatic sphingolipids relate to insulin resistance, oxidative stress, and inflammation in nonalcoholic steatohepatitis[J]. Diabetes Care, 2018, 41(6): 1235-1243. DOI: 10.2337/dc17-1318
    [9] LUUKKONEN PK, ZHOU Y, SÄDEVIRTA S, et al. Hepatic ceramides dissociate steatosis and insulin resistance in patients with non-alcoholic fatty liver disease[J]. J Hepatol, 2016, 64(5): 1167-1175. DOI: 10.1016/j.jhep.2016.01.002
    [10] HU Y, LIU ZX, FU N, et al. Role of ceramide in hepatic lipid accumulation in rats with non-alcoholic fatty liver disease[J]. World Chin J Dig, 2015, 23(32): 5196-5200. (in Chinese) https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XXHB201532019.htm

    胡杨, 刘朝霞, 傅念, 等. 神经酰胺在非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞脂质沉积中的作用[J]. 世界华人消化杂志, 2015, 23(32): 5196-5200. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XXHB201532019.htm
    [11] FERNANDEZ A, MATIAS N, FUCHO R, et al. ASMase is required for chronic alcohol induced hepatic endoplasmic reticulum stress and mitochondrial cholesterol loading[J]. J Hepatol, 2013, 59(4): 805-813. DOI: 10.1016/j.jhep.2013.05.023
    [12] FUCHO R, MARTÍNEZ L, BAULIES A, et al. ASMase regulates autophagy and lysosomal membrane permeabilization and its inhibition prevents early stage non-alcoholic steatohepatitis[J]. J Hepatol, 2014, 61(5): 1126-1134. DOI: 10.1016/j.jhep.2014.06.009
    [13] LIANGPUNSAKUL S, RAHMINI Y, ROSS RA, et al. Imipramine blocks ethanol-induced ASMase activation, ceramide generation, and PP2A activation, and ameliorates hepatic steatosis in ethanol-fed mice[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 2012, 302(5): g515-g523. DOI: 10.1152/ajpgi.00455.2011
    [14] GARCIA-RUIZ C, MATO JM, VANCE D, et al. Acid sphingomyelinase-ceramide system in steatohepatitis: A novel target regulating multiple pathways[J]. J Hepatol, 2015, 62(1): 219-233. DOI: 10.1016/j.jhep.2014.09.023
    [15] MVHLE C, WEINLAND C, GULBINS E, et al. Peripheral acid sphingomyelinase activity is associated with biomarkers and phenotypes of alcohol use and dependence in patients and healthy controls[J]. Int J Mol Sci, 2018, 19(12): 4028. DOI: 10.3390/ijms19124028
    [16] GUAN Y, LI X, UMETANI M, et al. Tricyclic antidepressant amitriptyline inhibits autophagic flux and prevents tube formation in vascular endothelial cells[J]. Basic Clin Pharmacol Toxicol, 2019, 124(4): 370-384. DOI: 10.1111/bcpt.13146
    [17] LU Z, LI Y, SYN WK, et al. Amitriptyline inhibits nonalcoholic steatohepatitis and atherosclerosis induced by high-fat diet and LPS through modulation of sphingolipid metabolism[J]. Am J Physiol Endocrinol Metab, 2020, 318(2): e131-e144. DOI: 10.1152/ajpendo.00181.2019
  • 加载中
图(3) / 表(9)
计量
  • 文章访问数:  116
  • HTML全文浏览量:  13
  • PDF下载量:  12
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2020-06-11
  • 修回日期:  2020-08-28
  • 刊出日期:  2021-01-18
  • 分享
  • 用微信扫码二维码

    分享至好友和朋友圈

目录

    /

    返回文章
    返回