基于Nrf2信号通路探讨茵陈蒿汤对阻塞性黄疸大鼠肾氧化应激损伤的影响及其作用机制
DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2023.05.019
Effect of Yinchenhao decoction on renal oxidative stress injury in rats with obstructive jaundice and its mechanism of action based on the nuclear factor erythroid 2-related factor 2 signaling pathway
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摘要:
目的 探讨茵陈蒿汤对阻塞性黄疸大鼠肾氧化应激损伤的作用与调节核因子E2相关因子2(Nrf2)表达及核异位的关系。 方法 32只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(S组)、模型组(O组)、低剂量茵陈蒿汤组(LY组)和高剂量茵陈蒿汤组(HY组),每组8只,S组大鼠仅游离上段胆总管但不予结扎,剩余各组大鼠胆总管中上1/3行双重结扎建立阻塞性黄疸模型,7天后LY组、HY组分别予茵陈蒿汤6.3 mL/kg和18.9 mL/kg灌胃,S组、O组每日给予等体积蒸馏水灌胃,连续7天,于第14天处理大鼠。采用ELISA法测定大鼠血清总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、丙氨酸转氨酶(ALT)、谷氨酰转移酶(GGT)、尿素氮(BUN)和血肌酐(Cr)水平;分光光度法检测大鼠肾组织氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)活性;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法分别检测肾组织中Nrf2、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、醌氧化还原酶1(NQO1)mRNA和蛋白表达水平;免疫组化检测肾组织中Nrf2蛋白的核异位情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,组内进一步两两比较采用LSD-t检验。 结果 与S组比较,O组大鼠TBil、DBil、ALT、GGT、BUN、Cr水平升高,SOD活性减弱,MDA水平升高,差异均有统计学意义(P值均<0.05);与O组比较,LY组和HY组肝、肾功能指标水平均下降,SOD活性升高,MDA水平降低,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。与S组比较,O组大鼠肾组织中Nrf2、NQO1 mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P值均<0.05);与O组比较,LY组和HY组Nrf2、NQO1 mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P值均<0.05);各组大鼠肾组织中Keap1蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)。与S组比较,O组大鼠肾组织中Nrf2细胞核内阳性率显著降低(P<0.05);与O组比较,LY组和HY组Nrf2细胞核内阳性率均显著升高(P值均<0.05)。 结论 茵陈蒿汤可以有效减轻阻塞性黄疸引起的肾损伤,其作用机制可能是通过上调大鼠肾组织中Nrf2蛋白的表达,并调控Nrf2蛋白核异位,从而介导下游NQO1蛋白的表达,调节阻塞性黄疸引起的氧化应激反应,进而减轻大鼠肾损伤。 -
关键词:
- 黄疸, 阻塞性 /
- 肾损伤 /
- 茵陈蒿汤 /
- 氧化性应激 /
- 大鼠, Sprague-Dawley
Abstract:Objective To investigate the effect of Yinchenhao decoction on renal oxidative stress injury in rats with obstructive jaundice and its association with the regulation of the expression of nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) and nuclear translocation. Methods A total of 32 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into sham-operation group (S group), model group (O group), low-dose Yinchenhao decoction group (LY group), and high-dose Yinchenhao decoction group (HY group), with 8 rats in each group. For the rats in the S group, the upper common bile duct was isolated without ligation, and for those in the other groups, double ligation of the middle and upper 1/3 of the common bile duct was performed to establish a model of obstructive jaundice. After 7 days, the rats in the LY group and the HY group were given Yinchenhao decoction by gavage at a dose of 6.3 and 18.9 mL/kg, respectively, while those in the S and O groups were given an equal volume of distilled water by gavage every day for 7 consecutive days, and the rats were treated on day 14. ELISA was used to measure the serum levels of total bilirubin (TBil), direct bilirubin (DBil), alanine aminotransferase (ALT), gamma-glutamyl transpeptidase (GGT), blood urea nitrogen (BUN), and creatinine (Cr); spectrophotometry was used to measure the activity of the oxidative stress factors superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) in renal tissue; quantitative real- time PCR and Western blotting were used to measure the mRNA and protein expression levels of Nrf2, Kelch-like ECH-associated protein 1 (Keap1), and NAD(P)H quinone dehydrogenase 1 (NQO1) in renal tissue; immunohistochemistry was used to measure observe the nuclear translocation of Nrf2 protein in renal tissue. A one-way analysis of variance was used for comparison of continuous data between multiple groups, and the least significant difference t-test was used for further pairwise comparison within groups. Results Compared with the S group, the O group had significant increases in the levels of TBil, DBil, ALT、GGT, BUN, and Cr, a significant reduction in the activity of SOD, and a significant increase in the level of MDA (all P < 0.05). Compared with the O group, the LY group and the HY group had significant reductions in liver and renal function parameters, a significant increase in the activity of SOD, and a significant reduction in the level of MDA (all P < 0.05). Compared with the S group, the O group had significant reductions in the mRNA and protein expression levels of Nrf2 and NQO1 in renal tissue (all P < 0.05), and compared with the O group, the LY group and the HY group had significant increases in the mRNA and protein expression levels of Nrf2 and NQO1 (all P < 0.05), while there was no significant difference in the protein expression level of Keap1 between groups (P > 0.05). Compared with the S group, the O group had a significant reduction in the positive rate of Nrf2 in cell nucleus in renal tissue (P < 0.05), and compared with the O group, the LY group and the HY group had a significant increase in the positive rate of Nrf2 in cell nucleus (P < 0.05). Conclusion Yinchenhao decoction can effectively alleviate renal injury caused by obstructive jaundice, possibly by upregulating the protein expression of Nrf2 in renal tissue and regulating the nuclear translocation of Nrf2 protein, so as to mediate the protein expression of downstream NQO1, regulate oxidative stress response caused by obstructive jaundice, and thereby alleviate renal injury in rats. -
Key words:
- Jaundice, Obstructive /
- Renal Injury /
- Yinchenhao Decoction /
- Oxidative Stress /
- Rats, Sprague-Dawley
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阻塞性黄疸患者通常伴有不同程度的肾损伤,手术打击可导致并发急性肾衰竭乃至死亡,因此采取有效措施防治肾衰竭的发生具有重要意义[1]。阻塞性黄疸引起肾损伤的原因未明,氧化应激损伤可能是导致肾损伤的重要机制[2]。核因子E2相关因子2(NF-E2 related factor 2, Nrf2)是组织和细胞中抗氧化剂减少的关键调节因子。在正常情况下,Nrf2与细胞质中的Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1, Keap1)结合,可通过泛素-蛋白酶体途径快速降解[3]。当身体受到氧化应激刺激时,Nrf2从隔离状态释放并转移到细胞核,在细胞核中促进抗氧化和细胞保护基因的转录。本实验通过构建阻塞性黄疸大鼠模型,研究茵陈蒿汤对大鼠胆道梗阻时肾损伤的影响与调节Nrf2表达及核异位的关系,为临床应用提供实验依据。
1. 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物
健康SPF级雄性SD大鼠32只,体质量200~230 g,购买于北京华阜康生物科技股份有限公司[实验动物生产许可证号:SCXK(京)2019-0010;实验动物使用许可证号:SCXK(津)2020-0008],饲养于天津市中西医结合医院动物实验室。大鼠标准饲料喂养,饮用水自由,均分笼饲养,每笼5只,光照与黑暗各12 h交替处理,湿度为50%~60%,温度为20~22 ℃,适应性喂养1周。
1.1.2 实验药物和试剂
中药购于天津市中西医结合医院中药饮片药房,按照《伤寒论》中茵陈蒿汤剂量组成换算:茵陈120 g,栀子80 g,大黄40 g,共计240 g[4]。中药浸泡30 min后,煎煮2次,取2次煎煮液浓缩至240 mL,所得茵陈蒿汤含生药量1 g/mL。血清总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、丙氨酸转氨酶(ALT)、谷氨酰转移酶(GGT)、尿素氮(BUN)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平检测试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司(货号:BC5180、BC5170、BC1550、BC1220、BC1530、BC0170、BC0020);血肌酐(Cr)水平检测试剂盒购自北京艾普希隆生物科技有限公司(货号:G1204F);Nrf2、Keap1抗体、蛋白Marker购自赛默飞世尔科技(中国)有限公司(货号:PA5-27882、PA5-99434、PA5-26617);醌氧化还原酶1(NQO1)抗体购自美国Abcam公司(货号:ab138491);β-肌动蛋白(β-actin)多克隆抗体购自武汉三鹰生物技术有限公司(货号:66009-1-Ig);辣根酶标记山羊抗兔/抗小鼠IgG、SP法二抗试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司(货号:ZB-2301、ZB-2305)。0.45 μm PVDF膜、化学发光底物ECL试剂盒、RIPA裂解液购自密理博(中国)有限公司(货号:IPHV00010、WBKLS0500、20-188);蛋白定量试剂盒、5×蛋白上样缓冲液购自北京索莱宝科技有限公司(货号:PC0020、P1041)。
1.1.3 主要设备和仪器
3-30型号K低温离心机(德国Sigma公司);电泳仪(BIO-RAD公司,PowerPace Basic);酶标仪(上海科华生物工程股份有限公司,ST-360);凝胶成像仪(上海天能科技有限公司,4800Multi);QuantStudio 3型PCR扩增仪(美国ABI公司);T100型热循环PCR仪(美国Bio-Rad公司);倒置相差显微镜(日本OLYMPUS)。
1.2 实验方法
1.2.1 大鼠分组及干预方法
将32只大鼠采用随机数字表法分为假手术组(S组)、模型组(O组)、低剂量茵陈蒿汤组(LY组)、高剂量茵陈蒿汤组(HY组),每组8只。将O组、LY组、HY组大鼠采用胆管双重结扎的方法建立阻塞性黄疸模型,具体步骤如下:术前12 h禁食水,予面罩吸入异氟烷麻醉,充分消毒大鼠腹部,于上腹正中切口入腹。于胆总管中上1/3行双重结扎建立阻塞性黄疸模型。S组大鼠仅游离上段胆总管但不予结扎。手术后7天,观察大鼠小便、皮毛、爪尾颜色变黄,并且出现活动减少、被毛松散、条状稀便且臭秽等表现后即表明阻塞性黄疸模型建立成功。建模成功后,LY组大鼠每日定时予茵陈蒿汤6.3 mL/kg灌胃,HY组大鼠予茵陈蒿汤18.9 mL/kg灌胃,S组和O组大鼠予6.3 mL/kg蒸馏水灌胃。连续灌胃7天。采取异氟烷吸入麻醉,下腔静脉采血,离心后备用;充分显露肾脏,取部分肾组织置于塑料试管中,编号保存于-80 ℃冰箱中备用,取部分肾组织放入4%多聚甲醛中固定后包埋蜡块备用。
1.2.2 血清肝、肾功能测定
血液标本静置30 min,以3 000 r/min离心10 min后取血清,按照试剂盒说明书步骤分别检测各组大鼠血清TBil、DBil、ALT、GGT、BUN、Cr水平。
1.2.3 检测大鼠肾组织SOD、MDA水平
取另一部分的肾组织按要求制备肾组织匀浆液,以4 000 r/min离心15 min,分离上清液,按照试剂盒说明书检测肾组织中SOD、MDA水平。
1.2.4 实时荧光定量PCR检测大鼠肾组织中Nrf2、Keap1、NQO1 mRNA的水平
采用Prime5.0软件设计Nrf2、Keap1、NQO1、β-actin基因引物序列(表 1),由北京赛百盛基因技术有限公司合成。按照说明书裂解组织,提取总RNA并检测其浓度和纯度。按照逆转录试剂盒对RNA进行逆转录,合成扩增前cDNA。以2 μL cDNA为模板,β-actin为内参mRNA,采用SYBR Green依次按照95 ℃预变性2 min,94 ℃变性20 s,60 ℃退火20 s,72 ℃延伸30 s,共40个循环,检测基因的表达水平按照2-ΔΔCt法进行定量分析。
表 1 引物序列Table 1. Primer sequence基因 引物序列 扩增片段长度(bp) Nrf2 上游5′-CTTTAGTCAGCGACAGAAGGAC-3′ 227 下游5′-AGGCATCTTGTTTGGGAATGTG-3′ Keap1 上游5′- CGGGGACGCAGTGATGTATG-3′ 85 下游5′-TGTGTAGCTGAAGGTTCGGTTA-3′ NQO1 上游5′- AGGATGGGAGGTACTCGAATC-3′ 127 下游5′-TGCTAGAGATGACTCGGAAGG-3′ β-actin 上游5′- GTGACGTTGACATCCGTAAAGA-3′ 245 下游5′-GCCGGACTCATCGTACTCC-3′ 1.2.5 蛋白免疫印迹检测肾组织中Nrf2、Keap1、NQO1蛋白的表达
液氮研磨-80 ℃下保存的肾组织50 mg,加入裂解液(含蛋白酶抑制剂),置于冰上裂解,18 759×g离心30 min,吸取上清液,测定样品蛋白浓度,加入SDS-loading buffer,100 ℃金属浴10 min,每孔上样20 μg,进行电泳分析,转膜,封闭,加入Nrf2(1∶500)、Keap1(1∶500)、NQO1(1∶10 000)、β-actin(1∶5 000) 一抗4 ℃孵育过夜;TBST洗膜,加入HRP标记的羊抗兔IgG二抗(1∶8 000)孵育1 h,洗膜,显色液孵育2 min,成像仪上进行信号检测,分析条带。数码凝胶图像分析系统检测蛋白阳性表达情况,比较各组蛋白表达水平。
1.2.6 免疫组化检测肾组织中Nrf2蛋白的核异位情况
标本常规石蜡包埋制成5 μm切片,采用免疫组化法进行染色。取3组大鼠肾组织包埋成石蜡组织块,石蜡切片常规脱蜡水化;在pH=6的0.01 mmol/L柠檬酸钠缓冲液中,微波大火热抗原修复15 min;3%过氧化氢溶液封闭15 min;磷酸盐缓冲液浸洗后Nrf2一抗(1∶100)湿盒中4 ℃过夜进行孵育;二抗(1∶1 000),37 ℃孵育20 min;二氨基联苯胺显色,二次蒸馏水浸洗后苏木素复染细胞核1 min;梯度酒精分色,二甲苯脱水透明5 min两次,风干后中性树脂封片。倒置显微镜观察记录,选择各组的阳性和阴性组织相,进行200×的显微照相。选择有意义的组织相,按样本编号保存图像。并对每张切片随机选取3个视野,计数核内阳性表达细胞数,结果以阳性表达细胞数/总细胞数百分比表示。
1.3 统计学方法
采用SPSS 26.0统计软件进行数据分析。计量资料以x±s表示,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 各组大鼠血清中肝、肾功能指标变化比较
与S组比较,O组大鼠血清中TBil、DBil、ALT、GGT、BUN、Cr水平均明显升高(P值均<0.05);与O组比较,茵陈蒿汤各剂量组上述指标显著降低(P值均<0.05),且以茵陈蒿汤高剂量组效果最为明显(P值均<0.05)(表 2)。
表 2 大鼠血清中TBil、DBil、ALT、GGT、BUN、Cr水平比较Table 2. Comparison of serum TBil, DBil, ALT, GGT, BUN and Cr levels in rats组别 动物数(只) TBil (μmol/L) DBil (μmol/L) ALT (U/L) GGT (U/L) BUN (mmol/L) Cr (μmol/L) S组 8 1.83±0.331) 0.87±0.441) 63.17±10.291) 1.34±0.651) 3.90±0.601) 28.05±1.751) O组 8 209.80±17.47 146.99±13.74 415.23±55.93 47.57±10.97 7.28±1.01 33.41±1.77 LY组 8 151.51±13.471) 114.11±14.481) 291.67±30.681) 30.53±6.691) 5.27±1.161) 30.45±1.951) HY组 8 122.30±7.261)2) 85.70±13.261)2) 189.41±47.321)2) 20.83±4.611)2) 4.01±0.261)2) 28.38±1.761)2) F值 455.164 229.455 111.746 63.779 30.085 18.335 P值 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 注:与O组比较,1)P<0.05;与LY组比较,2)P<0.05。 2.2 各组大鼠肾组织SOD、MDA水平比较
与S组比较,O组大鼠肾组织SOD活性减弱,MDA水平升高(P值均<0.05);与O组比较,茵陈蒿汤各剂量组SOD活性均增强,MDA水平均下降,并以茵陈蒿汤高剂量组效果最为明显(P值均<0.05)(表 3)。
表 3 大鼠肾组织SOD、MDA水平比较Table 3. Comparison of SOD and MDA levels in renal tissues of rats组别 动物数(只) SOD(U/mg) MDA(nmol/mg) S组 8 67.57±6.501) 2.66±0.681) O组 8 45.38±4.98 4.01±0.43 LY组 8 71.75±10.891) 3.23±0.381) HY组 8 86.00±6.701)2) 2.53±0.371)2) F值 39.336 15.919 P值 <0.001 <0.001 注:与O组比较,1)P<0.05;与LY组比较,2)P<0.05。 2.3 各组大鼠肾组织中Nrf2、Keap1、NQO1 mRNA的表达
各组大鼠肾组织中Keap1 mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。与S组相比,O组大鼠肾组织中Nrf2、NQO1 mRNA的表达均显著降低(P值均<0.05);茵陈蒿汤各剂量组Nrf2、NQO1 mRNA的表达与O组相比均有不同程度的升高(P值均<0.05),以茵陈蒿汤高剂量组效果最为明显(P值均<0.01)(图 1)。
2.4 各组大鼠肾组织中Nrf2、Keap1、NQO1蛋白的表达
各组大鼠肾组织中Keap1蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。与S组比较,O组大鼠肾组织中Nrf2、NQO1蛋白的表达均降低(P值均<0.05);与O组相比,茵陈蒿汤各剂量组Nrf2、NQO1蛋白的表达均有不同程度的升高(P值均<0.05),以茵陈蒿汤高剂量组效果最为明显(P值均<0.01)(图 2、3)。
2.5 各组大鼠肾组织中Nrf2蛋白核异位情况
S组大鼠肾小管上皮细胞有少量棕黄色颗粒,整体颜色较浅;O组棕黄色颗粒较S组减少;茵陈蒿汤各剂量组中可见大量棕黄色颗粒,整体颜色较深,且大部分细胞核呈棕黄色(图 4)。与S组比较,O组大鼠肾皮质组织中Nrf2细胞核内阳性率降低(P<0.05);与O组相比,茵陈蒿汤各剂量组Nrf2细胞核内阳性率均显著升高(P值均<0.01)(图 5)。
3. 讨论
阻塞性黄疸是由各种原因引起的细小胆管、肝总管或胆总管机械性梗阻所致,是临床肝胆外科常见的疾病。它会对全身各个脏器造成不同程度的损伤,肾脏是对由阻塞性黄疸引起的各种损伤中最为敏感的器官之一。急性肾衰竭是阻塞性黄疸患者严重的并发症之一,其发生率为6%~8%,病情危险,患者病死率可高达68%[5]。本研究发现,阻塞性黄疸发生后,大鼠肝、肾功能均呈现不同程度的损伤,这与以往的研究[6]结果一致,提示阻塞性黄疸发生时,除肝脏以外,肾脏是另一重要的损伤靶器官。有临床研究[1]表明,阻塞性黄疸患者肾小球滤过率减少或肾功能障碍与血液中脂质过氧化和抗氧化状态的改变有关,但目前发生机制仍未完全明确。
茵陈蒿汤是临床上治疗黄疸的中医经典名方,由茵陈、栀子、大黄组成,主治湿热黄疸。药理学研究[7]表明,茵陈其主要活性成分为香豆素类、黄酮类、有机酸类、挥发油等成分,发挥抗菌、抗炎、抗氧化等药理活性。大黄中主要包含蒽衍生物类、挥发油类、苷类化合物、有机酸类等成分,这些成分在保护肝肾功能、调节消化系统功能、消炎利胆及促进胰液分泌、抗氧化应激、减轻疼痛、抗肿瘤方面起到重要作用[8]。栀子中主要包括环烯醚萜类、萜苷类、黄酮类、挥发油、有机酸酯类、各种微量元素等化学成分。栀子的作用为促进胆汁分泌、抗炎、抗氧化、保护肝功能、促进胰腺分泌、降压降糖降脂、改善胃功能等[9]。笔者团队前期研究[10-11]发现,茵陈蒿汤可通过减少线粒体DNA损伤、降低NO产生等途径减轻阻塞性黄疸大鼠肝脏氧化应激损伤,进而减轻阻塞性黄疸肝损伤,而茵陈蒿汤对阻塞性黄疸肾损伤的作用及机制是另一重要的探索方向。
Nrf2是对抗氧化应激的上游转录因子,调控抗氧化酶、Ⅱ相解毒酶等多种保护性蛋白的转录表达[12]。Nrf2是组织和细胞抗氧化还原的中枢调节者,而Keap1蛋白是一种对Nrf2具有抑制作用的特异负性调节蛋白[3]。正常生理状态下,Nrf2与Keap1蛋白偶联存在细胞质中,并处于稳定状态,可以在泛素-蛋白酶体途径作用下迅速降解[13]。机体受到刺激发生氧化应激时,活性氧自由基通过对Keap1进行修饰,导致其构象发生改变,造成Nrf2与Keap1解偶联,从而使Nrf2活化[14-15],Nrf2被激活并转移进入细胞核内,与小Maf蛋白结合成异二聚体。之后异二聚体与抗氧化反应元件相结合,启动NQO1、谷胱甘肽、谷胱甘肽-S-转移酶、血红素氧化酶等下游抗氧化保护基因及Ⅱ相解毒酶基因的转录,这些细胞因子在减轻机体组织氧化应激损伤、调节机体解毒代谢方面发挥了重要作用[16-17]。
本研究发现,阻塞性黄疸大鼠出现肝、肾损伤,肾组织中SOD活性减弱,MDA水平升高,Nrf2、NQO1 mRNA及蛋白表达水平均降低,表明阻塞性黄疸可抑制Nrf2信号通路相关蛋白表达,导致肾脏的抗氧化应激损伤;茵陈蒿汤可以改善阻塞性黄疸大鼠的肝、肾损伤,并增强肾组织中SOD活性,降低MDA水平,提高大鼠肾组织中Nrf2、NQO1 mRNA及蛋白表达水平,而对Keap1表达无明显影响,提示茵陈蒿汤可能上调Nrf2蛋白表达,而并非通过调节Keap1的表达来启动下游NQO1基因,发挥抗氧化应激作用,这与Lu等[18]关于氧化应激损伤的细胞中Nrf2的调节作用与Keap1不相关的研究结果一致。另外,Nrf2只能在细胞核中发挥作用[19],免疫组化结果显示茵陈蒿汤可明显促进大鼠肾组织中Nrf2细胞核内聚集,表明茵陈蒿汤不仅可以上调肾组织中Nrf2蛋白的表达,并通过促进Nrf2蛋白核异位来启动下游抗氧化应激反应相关蛋白的表达。
综上所述,茵陈蒿汤可以有效减轻阻塞性黄疸引起的肾损伤,其作用机制可能是通过上调大鼠肾组织中Nrf2蛋白的表达,并促进Nrf2蛋白核异位来介导下游蛋白的表达,调节阻塞性黄疸引起的氧化应激反应,进而减少阻塞性黄疸大鼠肾氧化应激损伤。
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表 1 引物序列
Table 1. Primer sequence
基因 引物序列 扩增片段长度(bp) Nrf2 上游5′-CTTTAGTCAGCGACAGAAGGAC-3′ 227 下游5′-AGGCATCTTGTTTGGGAATGTG-3′ Keap1 上游5′- CGGGGACGCAGTGATGTATG-3′ 85 下游5′-TGTGTAGCTGAAGGTTCGGTTA-3′ NQO1 上游5′- AGGATGGGAGGTACTCGAATC-3′ 127 下游5′-TGCTAGAGATGACTCGGAAGG-3′ β-actin 上游5′- GTGACGTTGACATCCGTAAAGA-3′ 245 下游5′-GCCGGACTCATCGTACTCC-3′ 表 2 大鼠血清中TBil、DBil、ALT、GGT、BUN、Cr水平比较
Table 2. Comparison of serum TBil, DBil, ALT, GGT, BUN and Cr levels in rats
组别 动物数(只) TBil (μmol/L) DBil (μmol/L) ALT (U/L) GGT (U/L) BUN (mmol/L) Cr (μmol/L) S组 8 1.83±0.331) 0.87±0.441) 63.17±10.291) 1.34±0.651) 3.90±0.601) 28.05±1.751) O组 8 209.80±17.47 146.99±13.74 415.23±55.93 47.57±10.97 7.28±1.01 33.41±1.77 LY组 8 151.51±13.471) 114.11±14.481) 291.67±30.681) 30.53±6.691) 5.27±1.161) 30.45±1.951) HY组 8 122.30±7.261)2) 85.70±13.261)2) 189.41±47.321)2) 20.83±4.611)2) 4.01±0.261)2) 28.38±1.761)2) F值 455.164 229.455 111.746 63.779 30.085 18.335 P值 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 <0.001 注:与O组比较,1)P<0.05;与LY组比较,2)P<0.05。 表 3 大鼠肾组织SOD、MDA水平比较
Table 3. Comparison of SOD and MDA levels in renal tissues of rats
组别 动物数(只) SOD(U/mg) MDA(nmol/mg) S组 8 67.57±6.501) 2.66±0.681) O组 8 45.38±4.98 4.01±0.43 LY组 8 71.75±10.891) 3.23±0.381) HY组 8 86.00±6.701)2) 2.53±0.371)2) F值 39.336 15.919 P值 <0.001 <0.001 注:与O组比较,1)P<0.05;与LY组比较,2)P<0.05。 -
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