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细胞周期素D1对HBV转录和复制的影响
DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2023.02.010
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摘要:
目的 探究细胞周期素D1(cyclin D1，基因名CCND1)对HBV复制的影响及其机制。 方法 利用GSE84044数据集，采用Spearman秩相关分析HBV相关肝纤维化患者肝组织基因表达水平与血清HBV DNA载量之间的相关性。在HBV细胞复制模型中瞬时表达cyclin D1及cyclin D1持续激活突变体(T286A)蛋白，使用时间分辨免疫荧光及实时荧光定量PCR实验分别检测细胞培养上清液中的HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平，Western blot检测细胞内HBV core蛋白，反转录-实时荧光定量PCR法检测细胞内HBV RNA，双荧光素酶报告基因实验检测cyclin D1对HBV基本核心启动子(BCP)活性的影响。利用GSE83148数据集，分析CCND1与HBV相关调控因子表达的相关性。正态分布的计量资料两组间比较采用独立样本t检验；非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验。 结果 在GSE84044数据中，HBV相关肝纤维化患者的肝组织中有7个细胞周期调控基因与HBV DNA载量呈显著负相关(r值均＜-0.3，P值均＜0.05)，其中包括CCND1基因(r=-0.474，P＜0.001)。外源表达cyclin D1及cyclin D1 T286A突变体能降低HBV复制细胞模型培养上清液中的HBsAg、HBeAg及HBV DNA水平，以及细胞内core蛋白和HBV RNA水平；外源表达cyclin D1显著抑制了HBV BCP的转录活性；且慢性乙型肝炎患者肝组织中CCND1表达水平与抑制HBV复制的APOBEC3G(r=0.575，＜0.001)、SMC5(r=0.341，P＜0.001)和FOXM1(r=0.333，P＜0.001)表达呈显著正相关，而与HBV进入受体NTCP(r=-0.511，P＜0.001)和HBV复制正向调控转录因子HNF1α(r=-0.430，P＜0.001)表达呈显著负相关。在HepG2细胞中过表达cyclin D1降低HNF1α及NTCP转录水平。 结论 cyclin D1抑制HBV的转录和复制，可能与其下调HNF1α及NTCP表达有关。 Abstract:Objective To investigate the effect of cyclin D1 (with CCND1 as the gene name) on HBV replication and its potential mechanism. Methods With reference to GSE84044 dataset, the Spearman's rank correlation analysis was used to investigate the correlation between the expression levels of genes in liver tissue and serum HBV DNA load in patients with HBV-related liver fibrosis. Cyclin D1 and cyclin D1 T286A mutant were transiently expressed in the HBV cell replication model, and time-resolved immunofluorescence and quantitative real-time PCR were used to measure the levels of HBsAg/HBeAg and HBV DNA in cell culture supernatant; Western blot was used to measure the level of HBV core protein in cells; reverse-transcription quantitative real-time PCR was used to measure the level of HBV RNA in cells; dual-luciferase reporter assay was used to observe the effect of cyclin D1 on the activity of HBV basic core promoter (BCP). GSE83148 dataset was used to investigate the correlation between CCND1 and HBV-related regulatory factors. The independent samples t-test was used for comparison of normally distributed continuous data between two groups, and the Mann-Whitney U test was used for comparison of non-normally distributed continuous data between two groups. Results The analysis of GSE84044 data showed that 7 cell cycle genes were significantly negatively correlated with HBV DNA load in liver tissue of the patients with HBV-related liver fibrosis (all r < -0.3, all P < 0.05), which included the CCND1 gene (r=-0.474, P < 0.001). Exogenous expression of cyclin D1 and cyclin D1 T286A mutant reduced the levels of HBsAg, HBeAg, and HBV DNA in culture supernatant of the HBV replication cell model, as well as the levels of HBV core protein and HBV RNA in cells. Exogenous expression of cyclin D1 significantly inhibited the transcriptional activity of HBV BCP. The expression level of CCND1 in liver tissue of chronic hepatitis B patients was significantly positively correlated with the expression of APOBEC3G (r=0.575, P < 0.001), SMC5 (r=0.341, P < 0.001), and FOXM1 (r=0.333, P < 0.001) which inhibited HBV replication, while it was significantly negatively correlated with the expression of the HBV entry receptor NTCP (r=-0.511, P < 0.001) and HNF1α as the transcription factor for positive regulation of HBV replication (r=-0.430, P < 0.001). Overexpression of cyclin D1 in HepG2 cells reduced the transcriptional levels of HNF1α and NTCP. Conclusion Cyclin D1 inhibits HBV transcription and replication possibly by downregulating the expression of HNF1α and NTCP. -
Key words:
- Hepatitis B Virus /
- Cyclin D1 /
- Virus Replication /
- Gene Transcription
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根据世界卫生组织最新全球调查研究［1］，2020年全球5岁以下儿童HBsAg感染率为0.94%，每年新增HBV感染人口150万，每年死于乙型肝炎及其并发症约82万。2016年，世界卫生组织制定了全球性战略目标，旨在2030年之前消除病毒性肝炎这一全球性公共卫生威胁，将新发感染人数降低90%，死亡率降低65%［2］。中国感染HBV的患者高达7 000万，这给中国完成2030年消除乙型肝炎的任务带来了严峻挑战。中国的HBV感染主要通过母婴传播途径，往往伴随着一个持续时间较长的免疫耐受期，表现以ALT水平持续正常为特征［3］。多项回顾性研究及荟萃分析［4］结果表明，ALT水平持续正常患者的肝组织并不总是完全“正常”的，有40.0%～70.0%的肝组织已经出现显著的炎症坏死（G≥2）或纤维化（S≥2），部分甚至隐匿发展为肝硬化、肝细胞癌。
血清HBV DNA定量是评估HBV复制强度最主要的指标，用于评估疾病病程、确定抗病毒时机、判断疗效及预后等多种用途。1996年德国科学家Köck［5］在人体外周血清中发现HBV RNA。HBV RNA的本质是肝细胞核内闭合环状DNA（cccDNA）未经逆转录的前基因组RNA（pgRNA），未能有效地转录成松弛环状DNA（rcDNA），而是以病毒样颗粒的形式释放进入血液循环，最终形成“HBV RNA病毒样颗粒”［6-9］。不同于HBsAg水平受cccDNA的转录和翻译及宿主基因的HBV DNA转录的影响［10］，HBV RNA是cccDNA模板的直接下游产物，能更准确地反映核cccDNA库，尤其在已使用抗病毒治疗的患者中。对已使用抗病毒治疗的人群有研究［11］显示血清HBV RNA与肝组织病变程度及疾病进展均有关，而与未经治疗患者无关［12］。本研究旨在对不同正常水平ALT的CHB患者的肝组织病理与血清学指标相关性进行分析，为指导抗病毒药物使用的启动时机提供进一步依据。
1. 资料与方法
1.1 研究对象
收集2018年4月—2021年6月就诊于无锡市第五人民医院ALT水平正常的CHB患者的临床资料。所有血清学标本均收集于肝活检前。筛选标准：HBsAg阳性、HBV DNA阳性，血清AST、ALT水平持续正常（1年内持续随访3次，每次至少间隔3个月）。排除标准：既往抗HBV治疗史；合并其他病毒性肝炎、酒精性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、自身免疫性肝病、结缔组织病、药物性肝损伤、遗传代谢性疾病、累及全身系统性疾病等；明确肝硬化患者；妊娠患者；合并有血液系统疾病、恶性肿瘤等；合并HIV感染者。
1.2 HBV RNA的检测
由上海仁度生物科技股份有限公司提供血清HBV-pgRNA定量检测。使用HBV RNA实时荧光核酸恒温扩增法（simultaneous amplification and testing，SAT）试剂盒HBV-SAT kit（Shanghai Rendu Biotechnology Co.，Ltd，China）在AutoSAT全自动核酸检测分析系统上进行检测。具体操作按照AutoSAT仪器和试剂说明书进行。检测范围102～108拷贝/mL，检测下限为50拷贝/mL。
1.3 肝穿刺活检
所有患者进行肝穿刺活检前完善血常规、凝血功能、腹部超声等常规检查，排除穿刺禁忌证，签署肝穿刺活检知情同意书。患者去枕平卧位，手上抬平放至头部上方，B超引导下进行肝穿刺部位定位，对穿刺部位进行消毒，操作者戴无菌手套，铺巾，局部浸润麻醉，嘱患者配合呼吸，在B超引导下使用一次性全自动肝活体组织检查获得肝组织2条，置于4%甲醛溶液中进行组织固定，后续进行脱水、石蜡包埋、切片。肝组织分别予以HE染色、网状纤维染色、Masson染色、免疫组化染色（HBsAg和HBcAg）。
1.4 肝组织病理学诊断
采用我国新修订的慢性肝炎的病理学诊断标准［13］。将肝脏炎症活动程度≥G2定义为显著性炎症，纤维化程度≥S2定义为显著性纤维化。收集肝组织内HBsAg、HBcAg的免疫组化结果、肝脏炎症活动程度、肝纤维化分期及有无合并肝脂肪变性。
1.5 统计学方法
采用SPSS 26.0软件进行统计学分析，计数资料组间比较采用χ2检验。采用Speraman秩相关进行相关性分析。采用Logistic回归进行多因素分析。P<0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 一般资料
本研究共纳入137例CHB患者。其中男71例（51.8%），女66例（48.2%）。ALT≤20 U/L 47例，20～29 U/L 58例，30～40 U/L 32例。处于免疫耐受期6例（4.4%），处于免疫清除期0例，处于免疫控制期25例（18.2%），处于再活动期2例（1.5%），处于不确定期104例（75.9%）。
2.2 肝组织病理检查结果
CHB患者肝穿刺结果见表1。炎症活动程度分级以G2级（n=69，50.4%）为主，≥G2级82例（59.9%）；肝纤维化分期以S0～1期（n=47，34.3%）、S2期（n=47，34.3%）为主，≥S2期90例（65.7%）。ALT≤20 U/L、20～29 U/L、30～40 U/L组分别有57.4%、53.4%、75%的患者发生显著炎症坏死（≥G2），63.8%、62.1%、75%发生显著纤维化（≥S2）。
表 1 肝组织病理学炎症活动程度分级、纤维化分期情况Table 1. The result of liver Liver histopathology inflammation grading， fibrosis staging炎症活动程度分级 例（%） 纤维化分期 例（%） G0～1 55（40.1） S0～1 47（34.3） G2 69（50.4） S2 47（34.3） G3 13（9.5） S3 22（16.1） G4 0（0.0） S4 21（15.3） 2.3 临床资料与炎症活动程度分级和纤维化分期的关系
HBeAg阳性患者的炎症活动程度分级、肝纤维化分期与HBeAg阴性患者之间差异均有统计学意义（P值均<0.05）；不同水平的血清HBV DNA组间炎症活动程度分级差异有统计学意义（P<0.05），而纤维化程度差异无统计学意义（P=0.05）；不同水平的血清HBV RNA组间炎症活动程度分级、纤维化分期差异均有统计学意义（P值均<0.05）。不同年龄、不同ALT水平的炎症活动程度分级及纤维化分期差异均无统计学意义（P值均>0.05）（表2）。
表 2 临床资料与炎症活动程度分级、纤维化分期的关系Table 2. Relationship of clinical data to inflammation grading and fibrosis staging因素 例数 炎症活动程度分级 χ2值 P值 肝纤维化分期 χ2值 P值 G0～G1 G2 G3～G4 S0～S1 S2 S3～4 年龄 1.814 0.404 0.711 0.701 <30岁 8 4 4 0 2 4 2 30～39岁 38 17 19 2 13 17 8 ≥40岁 91 34 46 11 32 26 33 ALT 4.858 0.088 4.755 0.093 <20 U/L 47 20 23 4 17 22 8 20～29 U/L 58 27 27 4 22 16 20 30～40 U/L 32 8 19 5 8 9 15 血清HBeAg 10.008 0.040 7.996 0.046 阳性 28 8 12 8 10 6 12 阴性 109 47 57 5 37 41 31 血清HBV DNA 6.911 0.032 5.910 0.050 <104 IU/mL 96 44 44 8 37 32 27 104～<107 IU/mL 22 3 16 3 2 17 3 ≥107 IU/mL 19 8 9 2 8 6 5 血清HBV RNA 7.946 0.019 10.874 0.012 <104拷贝/mL 96 45 45 6 39 34 23 ≥104拷贝/mL 41 10 24 7 8 13 20 2.4 相关性分析结果
CHB患者的炎症分级与肝纤维化分期之间存在相关性（rs =0.732，P<0.05）。HBeAg阳性与血清HBV DNA、血清HBV RNA均呈现出正相关性（rs =0.513，P=0.006；rs =0.800，P<0.001）。血清HBV DNA水平与炎症活动程度分级、纤维化分期之间无相关性（rs =0.024，P=0.785；rs =0.039，P=0.652）。血清HBV RNA与炎症活动程度分级、纤维化分期之间存在显著相关性（rs =0.222，P=0.009；rs =0.187，P=0.029）。血清HBV DNA与血清HBV RNA间无相关性（P=0.050）。
2.5 多因素Logistic回归分析
将ALT、HBeAg、HBV DNA、HBV RNA血清学指标纳入多因素Logistic回归分析，结果提示HBeAg阳性是ALT水平正常的CHB患者肝脏发生炎症坏死（OR=-0.302，95%CI：-1.160～0.386，P=0.002）及纤维化（OR=-0.387，95%CI：-1.160～0.386，P=0.011）的独立危险因素。
3. 讨论
HBV感染约95%发生在婴儿期和幼儿期，相比之下仅有不到5%在成年后感染［14］。国内外指南将CHB感染过程分为4个阶段：HBeAg阳性慢性HBV感染（又称免疫耐受期、慢性HBV携带状态）、HBeAg阳性CHB（又称免疫清除期、免疫活动期）、HBeAg阴性慢性HBV感染（又称非活动期、免疫控制期、非活动性HBsAg携带状态）和HBeAg阴性CHB（又称再活动期）。然而临床上存在ALT水平正常、HBV DNA高水平、HBeAg阳性，看似属于HBeAg阳性的慢性HBV携带状态，即免疫耐受期，但其肝组织已出现明显炎症坏死或纤维化，根据血清HBV DNA及ALT水平难以明确感染分期，2016年和2018年美国肝病学会（AASLD）CHB指南［15-16］将这一情况称为不确定的“灰色地区”。2021年新加坡的一项大队列研究［17］对处于不确定期未经治疗的非肝硬化的CHB患者进行了平均约12.5年的长期随访，结果显示约有40%患者处于不确定期，持续处于不确定期CHB患者的肝细胞癌风险比不活跃期的CHB患者高14倍，表明不确定期的患者疾病进展风险极大，需要进一步评估抗病毒治疗的时机。中国《慢性乙型肝炎防治指南（2022年版）》［18］新增“不确定期”，这部分患者占CHB患者的28%～55%。而本研究纳入的137例ALT水平正常的CHB患者中，75%处于不确定期，65.7%已达到抗病毒指证，比既往研究结果高，因本研究纳入人群为ALT水平正常的CHB患者，其血清HBV DNA、肝脏病理并不完全一致，致使难以明确分期的患者比例较高。
ALT作为肝细胞受损时最灵敏的肝酶指标，其升高通常被作为抗病毒治疗的指征之一。本研究显示ALT水平正常的CHB患者的肝组织约59.9%显著炎症坏死，65.7%显著纤维化。进一步将ALT分为不同正常水平研究，结果显示不同正常水平ALT组间炎症活动程度和纤维化程度无明显差异。纪林秀等［19］对ALT水平正常及轻度升高的CHB患者的肝组织活检研究显示，随着ALT水平升高，肝组织的炎症坏死及纤维化程度均加重，这与本研究结果不同，可能因为随着HBV感染的进展，ALT水平逐渐升高，病毒复制引起的免疫反应对肝细胞的损害及炎症坏死逐渐加重，而炎症坏死持续存在或反复出现是慢性HBV感染者病情进展为肝硬化甚至肝癌的重要因素。但若病毒的免疫反应仅引起炎症和纤维化，而未损伤肝细胞，此时位于肝细胞质内的酶未释放入血，血清ALT可处于正常水平。因此，血清ALT水平不能完全准确反映HBV感染者肝脏的病理改变，且其水平受到多种因素的影响。
本研究显示ALT水平正常的CHB患者的肝脏炎症活动程度分级与纤维化分期之间存在正相关性，随着炎症程度的升高，纤维化程度越严重。ALT水平完全正常时，HBV长期感染使得肝脏反复出现炎症活动，持续不断的炎症活动持续刺激肝星状细胞活化、增殖，使得细胞外基质增生、沉积，导致肝组织内纤维化的程度逐渐升高。
HBV复制周期中，闭合环状DNA（cccDNA）作为乙型肝炎周期的中心，血清HBV DNA定量直接反映cccDNA的水平，即HBV的复制水平［20］。本研究显示不同血清HBV DNA定量与炎症分级、纤维化分期之间均无相关性，这与周旋等［21］的研究结果一致。周保仓等［22］研究显示血清HBV DNA与肝脏炎症等级呈正相关，与纤维化分期无相关性。上述结果存在一定差异的原因可能是慢性HBV感染是动态活动过程，是病毒和宿主免疫系统相互作用的结果，随着感染时间的增加，病毒在体内的拷贝数呈现指数级增长，且HBV cccDNA在肝细胞核中复制转录后，病毒基因组包裹在细胞质的衣壳中，逃避宿主的免疫监视［23］，机体的免疫应答未能应对或出现免疫耐受，致血清HBV DNA与肝组织改变间无相关性。
血清HBV RNA作为慢性HBV感染的新型标志物，目前研究主要集中于抗病毒治疗后的变化。本研究对未经治疗且ALT水平正常的CHB患者研究显示，血清HBV RNA与肝脏炎症程度及纤维化分期之间存在正相关性（P值均<0.05），这与Liu等［24］的研究一致。Bai等［25］研究显示pgRNA病毒粒子的包膜蛋白结构与HBV DNA病毒粒子相似，且细胞外HBV RNA具有作为合成病毒DNA模板的能力，细胞外HBV pgRNA病毒粒子可能具有感染性，使得肝组织内持续的病毒感染、复制，持续的炎症反应导致肝组织发生病变，炎症坏死及纤维化程度逐渐升高。
本研究还发现血清HBV RNA与血清HBV DNA无相关性。这可能与HBV在肝细胞内的复制过程有关。cccDNA下游的pgRNA有两种去路，其一是被衣壳内的聚合酶通过逆转录将pgRNA转化为rcDNA，再被病毒蛋白（HBsAg脂蛋白外膜）包裹成一个新的完整的HBV释放到细胞外或进入细胞核内补充cccDNA池；其二是由HBcAg组成的核衣壳包裹，形成HBV RNA病毒颗粒并通过多种途径出胞，最终进入外周血中。同时，病毒粒子出胞途径有多种，血清HBV DNA病毒粒子是通过天然内体分选复合体（endosomal sorting complex required for transport，ESCRT）依赖性多泡体途径输出［26］，研究报道裸衣壳的输出是由ESCRT-0成分（肝细胞生长因子调节的酪氨酸激酶底物）和ESCRT-Ⅲ结合蛋白Alix辅助的，是完整的独立于ESCRT通路。肝细胞中是否存在裸衣壳分泌途径仍有待确定。另一方面，CHB患者血液中的一些裸衣壳可能直接来源于肝脏炎症过程中凋亡的HBV阳性细胞，而不依赖于上述途径。也有可能一些循环衣壳直接从受损的（破碎的）病毒粒子中释放［27］。这些不同的释放路径都会影响血清HBV RNA在外周血中的定量。
本研究多因素Logistic回归分析显示，HBeAg阳性是CHB患者肝组织发生炎症坏死及纤维化的独立危险因素，与Bai等［28］研究结果一致，且随着HBeAg的升高，血清HBV DNA、HBV RNA逐渐升高。HBeAg阳性提示HBV复制活跃，传染性强，复制过程产物均升高，肝组织出现炎症及纤维化。
总之，ALT水平正常的HBV感染者存在不同程度的显著炎症坏死及纤维化，且不同正常水平ALT的CHB患者间无明显差异，HBeAg阳性是这类患者肝组织出现显著炎症坏死及纤维化的独立危险因素。同时血清HBV RNA与肝脏炎症坏死及纤维化程度呈正相关，这使其可以作为ALT水平正常的CHB人群一个潜在的血清学指标，其临床适用性待进一步验证。对于此类患者的抗病毒治疗需结合年龄、家族史、血清HBV DNA等综合评估的基础上，提高肝穿刺活检的普及性及必要性，更及时明确抗病毒治疗的启动时机，以免延误最佳治疗时机，及时抑制病毒复制，延缓疾病发展。但本研究样本量较小，且来源于单中心，需大规模和多中心队列进一步研究未经治疗的CHB患者的血清HBV RNA，提供更多的循证医学证据。
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注：a，GSE84044数据集中与患者HBV DNA载量相关的肝组织宿主基因，样本按照HBV DNA载量的高低从左到右排列，蓝色代表低表达，红色代表高表达；b，765个与HBV DNA载量显著相关基因和116个细胞周期基因的交集；c，肝组织中CCND1水平与血清HBV DNA载量之间的相关性分析。
图 1 肝组织基因表达与血清HBV DNA的相关性分析
Figure 1. Correlation analysis of host gene expression in liver tissue and serum HBV DNA level
注：a、b，外源表达cyclin D1降低HepG2和Huh-7细胞HBV core蛋白的水平；c、d，外源表达cyclin D1下调HepG2和Huh-7细胞培养上清液中的HBsAg、HBeAg与HBV DNA水平。
图 2 外源表达cyclin D1降低HBV的复制水平
Figure 2. Exogenous expression of cyclin D1 reduces the replication level of HBV
注：a，RT-qPCR检测cyclin D1和cyclin D1(T286A)过表达对HepG2细胞内HBV RNA的影响；b，双荧光素酶报告基因实验检测过表达cyclin D1和cyclin D1(T286A)对HBV BCP启动子活性的影响。
图 3 外源表达cyclin D1对HBV转录水平的影响
Figure 3. Effects of exogenous expression of cyclin D1 on HBV transcript level
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[1] GBD 2013 Mortality and Causes of Death Collaborators. Global, regional, and national age-sex specific all-cause and cause-specific mortality for 240 causes of death, 1990-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013[J]. Lancet, 2015, 385(9963): 117-171. DOI: 10.1016/S0140-6736(14)61682-2. [2] Chinese Society of Infectious Diseases, Chinese Medical Association; Chinese Society of Hepatology, Chinese Medical Association. Guidelines for the prevention and treatment of chronic hepatitis B (version 2019)[J]. J Clin Hepatol, 2019, 35(12): 2648-2669. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2019.12.007.中华医学会感染病学分会, 中华医学会肝病学分会. 慢性乙型肝炎防治指南(2019年版)[J]. 临床肝胆病杂志, 2019, 35(12): 2648-2669. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2019.12.007. [3] WANG J, HUANG H, LIU Y, et al. HBV genome and life cycle[J]. Adv Exp Med Biol, 2020, 1179: 17-37. DOI: 10.1007/978-981-13-9151-4_2. [4] XIA Y, CHENG X, LI Y, et al. Hepatitis B virus deregulates the cell cycle to promote viral replication and a premalignant phenotype[J]. J Virol, 2018, 92(19): e00722-18. DOI: 10.1128/JVI.00722-18. [5] YANG Y, YAN Y, CHEN Z, et al. Histone deacetylase inhibitors romidepsin and vorinostat promote hepatitis B virus replication by inducing cell cycle arrest[J]. J Clin Transl Hepatol, 2021, 9(2): 160-168. DOI: 10.14218/JCTH.2020.00105. [6] OTTO T, SICINSKI P. Cell cycle proteins as promising targets in cancer therapy[J]. Nat Rev Cancer, 2017, 17(2): 93-115. DOI: 10.1038/nrc.2016.138. [7] TCHAKARSKA G, SOLA B. The double dealing of cyclin D1[J]. Cell Cycle, 2020, 19(2): 163-178. DOI: 10.1080/15384101.2019.1706903. [8] QI Z, LI G, HU H, et al. Recombinant covalently closed circular hepatitis B virus DNA induces prolonged viral persistence in immunocompetent mice[J]. J Virol, 2014, 88(14): 8045-8056. DOI: 10.1128/JVI.01024-14. [9] WANG M, GONG Q, ZHANG J, et al. Characterization of gene expression profiles in HBV-related liver fibrosis patients and identification of ITGBL1 as a key regulator of fibrogenesis[J]. Sci Rep, 2017, 7: 43446. DOI: 10.1038/srep43446. [10] ZHOU W, MA Y, ZHANG J, et al. Predictive model for inflammation grades of chronic hepatitis B: Large-scale analysis of clinical parameters and gene expressions[J]. Liver Int, 2017, 37(11): 1632-1641. DOI: 10.1111/liv.13427. [11] RITCHIE ME, PHIPSON B, WU D, et al. limma powers differential expression analyses for RNA-sequencing and microarray studies[J]. Nucleic Acids Res, 2015, 43(7): e47. DOI: 10.1093/nar/gkv007. [12] R Core Team (2022). R: A language and environment for statistical computing[EB/OL]. https://www.R-project.org/ .[13] KANG J, WANG J, CHENG J, et al. Down-regulation of NTCP expression by cyclin D1 in hepatitis B virus-related hepatocellular carcinoma has clinical significance[J]. Oncotarget, 2017, 8(34): 56041-56050. DOI: 10.18632/oncotarget.10241. [14] JUNG YJ, KIM JW, PARK SJ, et al. c-Myc-mediated overexpression of miR-17-92 suppresses replication of hepatitis B virus in human hepatoma cells[J]. J Med Virol, 2013, 85(6): 969-978. DOI: 10.1002/jmv.23534. [15] ALMAJHDI FN, AL-QUDARI AY, HUSSAIN Z. Differential expression of transforming growth factor-β1 and HBx enhances hepatitis B virus replication and augments host immune cytokines and chemokines[J]. Ann Hepatol, 2013, 12(3): 408-415. [16] ALT JR, CLEVELAND JL, HANNINK M, et al. Phosphorylation-dependent regulation of cyclin D1 nuclear export and cyclin D1-dependent cellular transformation[J]. Genes Dev, 2000, 14(24): 3102-3114. DOI: 10.1101/gad.854900. [17] DIEHL JA, CHENG M, ROUSSEL MF, et al. Glycogen synthase kinase-3beta regulates cyclin D1 proteolysis and subcellular localization[J]. Genes Dev, 1998, 12(22): 3499-3511. DOI: 10.1101/gad.12.22.3499. [18] YAN Y, ALLWEISS L, YANG D, et al. Down-regulation of cell membrane localized NTCP expression in proliferating hepatocytes prevents hepatitis B virus infection[J]. Emerg Microbes Infect, 2019, 8(1): 879-894. DOI: 10.1080/22221751.2019.1625728. [19] KÖNIG A, YANG J, JO E, et al. Efficient long-term amplification of hepatitis B virus isolates after infection of slow proliferating HepG2-NTCP cells[J]. J Hepatol, 2019, 71(2): 289-300. DOI: 10.1016/j.jhep.2019.04.010. [20] ELLER C, HEYDMANN L, COLPITTS CC, et al. A genome-wide gain-of-function screen identifies CDKN2C as a HBV host factor[J]. Nat Commun, 2020, 11(1): 2707. DOI: 10.1038/s41467-020-16517-w. [21] RANEY AK, EASTON AJ, MILICH DR, et al. Promoter-specific transactivation of hepatitis B virus transcription by a glutamine- and proline-rich domain of hepatocyte nuclear factor 1[J]. J Virol, 1991, 65(11): 5774-5781. DOI: 10.1128/JVI.65.11.5774-5781.1991. [22] ZHENG Y, LI J, OU JH. Regulation of hepatitis B virus core promoter by transcription factors HNF1 and HNF4 and the viral X protein[J]. J Virol, 2004, 78(13): 6908-6914. DOI: 10.1128/JVI.78.13.6908-6914.2004. [23] WANG WX, LI M, WU X, et al. HNF1 is critical for the liver-specific function of HBV enhancer Ⅱ[J]. Res Virol, 1998, 149(2): 99-108. DOI: 10.1016/s0923-2516(98)80085-x. [24] QUASDORFF M, HÖSEL M, ODENTHAL M, et al. A concerted action of HNF4alpha and HNF1alpha links hepatitis B virus replication to hepatocyte differentiation[J]. Cell Microbiol, 2008, 10(7): 1478-1490. DOI: 10.1111/j.1462-5822.2008.01141.x. -
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