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慢性乙型肝炎及肝硬化患者血清血管生成素1、2及其比值变化与HBV DNA和ALT的相关性分析
DOI: 10.12449/JCH240609
Correlation of serum angiopoietin-1， angiopoietin-2， and angiopoietin-1/angiopoietin-2 ratio with HBV DNA and alanine aminotransferase in patients with chronic hepatitis B or liver cirrhosis
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摘要:
目的 分析血清血管生成素（Ang）1、2及其比值变化与慢性乙型肝炎（CHB）、肝硬化患者HBV DNA和ALT的相关性。 方法 选取2018年3月—2019年10月首都医科大学附属北京佑安医院收治的CHB患者99例，肝硬化患者59例，收集临床资料和血清标本；另选同期46例健康体检者作为对照组。所有患者均采用PCR法检测血清HBV DNA；采用酶联免疫吸附法检测血清Ang-1和Ang-2水平，比较各组血清Ang-1和Ang-2及Ang-1/Ang-2的差异。非正态分布的计量资料多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验，进一步两两比较采用Bonferroni法；采用Spearman方法分析Ang-1、Ang-2、Ang-1/Ang-2与HBV DNA、ALT的相关性。 结果 与对照组（671.0 pg/mL）相比，CHB组（479.0 pg/mL）和肝硬化组（208.4 pg/mL）Ang-1水平显著降低（P值均<0.05）；与CHB组相比，肝硬化组Ang-1水平显著降低（P<0.001）。与对照组（198.0 pg/mL）相比，CHB组（286.1 pg/mL）和肝硬化组（438.4 pg/mL）Ang-2水平显著升高（P值均<0.001）；与CHB组相比，肝硬化组Ang-2水平显著升高（P<0.001）。与对照组（3.4）相比，CHB组（1.6）和肝硬化组（0.5）Ang-1/Ang-2比值显著降低（P值均<0.001）；与CHB组相比，肝硬化组Ang-1/Ang-2比值显著降低（P<0.001）。Spearman分析显示，CHB组Ang-1与HBV DNA及ALT均呈负相关（r值分别为-0.400、-0.394，P值均˂0.001）；Ang-2与HBV DNA及ALT均呈正相关（r值分别为0.365、0.351，P值均˂0.001）；Ang-1/Ang-2与HBV DNA及ALT均呈负相关（r值分别为-0.463、-0.473，P值均˂0.001）；而肝硬化组Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2均与HBV DNA和ALT无相关性（P值均˃0.05）。 结论 CHB、肝硬化患者血清Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2有显著改变，其中肝炎组Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2在一定程度上反映CHB患者肝损伤的程度。 Abstract:Objective To investigate the correlation of serum angiopoietin-1 （Ang-1）， angiopoietin-2 （Ang-2）， and Ang-1/Ang-2 ratio with HBA DNA and alanine aminotransferase （ALT） in patients with chronic hepatitis B （CHB） or liver cirrhosis. Methods Clinical data and serum specimens were collected from 99 patients with CHB and 59 patients with liver cirrhosis who were admitted to Beijing YouAn Hospital， Capital Medical University， from March 2018 to October 2019， and 46 individuals who underwent physical examination were enrolled as control group. PCR was used to measure serum HBV DNA level， and ELISA was used to measure the serum levels of Ang-1 and Ang-2. The serum levels of Ang-1 and Ang-2 and Ang-1/Ang-2 ratio were compared between groups. The Kruskal-Wallis H test was used for comparison of non-normally distributed continuous data between multiple groups， and the Bonferroni method was used for further comparison between two groups； the Spearman correlation analysis was used to investigate the correlation of Ang-1， Ang-2， and Ang-1/Ang-2 ratio with HBV DNA and ALT. Results Compared with the control group， the CHB group and the liver cirrhosis group had a significant reduction in the level of Ang-1 （479.0 pg/mL and 208.4 pg/mL vs 671.0 pg/mL， both P<0.05）， and compared with the CHB group， the liver cirrhosis group had a significant reduction in the level of Ang-1 （P<0.001）. Compared with the control group， the CHB group and the liver cirrhosis group had a significant increase in the level of Ang-2 （286.1 pg/mL and 438.4 pg/mL vs 198.0 pg/mL， both P<0.001）， and compared with the CHB group， the liver cirrhosis group had a significant increase in the level of Ang-2 （P<0.001）. Compared with the control group， the CHB group and the liver cirrhosis group had a significant reduction in Ang-1/Ang-2 ratio （1.6 and 0.5 vs 3.4， both P<0.001）， and compared with the CHB group， the liver cirrhosis group had a significant reduction in Ang-1/Ang-2 ratio （P<0.001）. The Spearman correlation analysis showed that in the CHB group， Ang-1 was negatively correlated with HBV DNA and ALT （r=-0.400 and -0.394， both P˂0.001）， Ang-2 was positively correlated with HBV DNA and ALT （r=0.365 and 0.351， both P<0.001）， and Ang-1/Ang-2 ratio was negatively correlated with HBV DNA and ALT （r=-0.463 and -0.473， both P<0.001）； in the liver cirrhosis group， Ang-1， Ang-2， and Ang-1/Ang-2 ratio had no correlation with HBV DNA or ALT （all P>0.05）. Conclusion There are significant changes in the serum levels of Ang-1 and Ang-2 and Ang-1/Ang-2 ratio in patients with CHB or liver cirrhosis， and Ang-1， Ang-2， and Ang-1/Ang-2 ratio reflects the degree of liver injury in patients with CHB to a certain extent. -
Key words:
- Angiopoietin-1 /
- Angiopoietin-2 /
- Hepatitis B， Chronic /
- Liver Cirrhosis /
- Hepatitis B virus /
- Alanine Transaminase
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血管生成素系统由血管生成素（Angiopoietin，Ang）和其酪氨酸激酶受体Tie-2组成，Ang包括Ang-1、Ang-2、Ang-3、Ang-4，其中研究比较多的是Ang-1和Ang-2［1］。Ang-1由肝星状细胞分泌，主要功能是促进血管生长和稳定，抑制炎症，促进内皮细胞存活［2］。相反，Ang-2由血管内皮细胞分泌，主要功能是促进血管的活化和炎症反应，拮抗Ang-1的作用［3］。由于Ang-1和Ang-2是拮抗配体，因此Ang-1/Ang-2比值反映了它们之间的不平衡，与疾病进展和预后相关［4］。血管生成素系统主要涉及血管稳定和炎症反应，已经有许多疾病将其作为疾病严重程度及预后的靶标，如糖尿病、结核、败血症等［5-6］。但在慢性乙型肝炎（CHB）、肝硬化研究方面，尚未见报道。
1. 资料与方法
1.1 研究对象
选取首都医科大学附属北京佑安医院2018年3月—2019年10月收治的CHB、乙型肝炎肝硬化患者，收集临床资料和血清标本；另选同期健康体检者作为对照组。纳入标准：（1）CHB和肝硬化诊断符合《慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）》［7］；（2）既往无抗病毒治疗史，初治，未曾进行抗纤维化干预。排除标准：（1）合并甲、丙、丁、戊型肝炎，药物性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、酒精性肝病及自身免疫性肝病；（2）合并糖尿病、结核、肾病、血管疾病等；（3）明确诊断的肝癌患者；（4）临床资料缺失或检查不完善的患者。
1.2 研究方法
1.2.1 PCR法定量检测HBV DNA
采用罗氏Light Cycler 480检测仪，试剂盒采用中国圣湘生物科技股份有限公司的HBV DNA试剂盒，检测灵敏度为100 IU/mL。
1.2.2 血生化检验
入组患者均禁食12 h后采静脉血，采用日本Olympus AU 2700全自动生物化学仪器检测ALT水平。
1.2.3 ELISA 方法检测血清Ang-1、Ang-2水平
采用R & D试剂盒，操作方法按照试剂盒说明书。
1.3 统计学方法
应用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。正态分布的计量资料以
2. 结果
2.1 一般资料
本研究共纳入患者158例，其中CHB组99例，男57例，女42例，平均年龄为（47.62±8.34）岁，平均病程为（8.95±2.13）年；肝硬化组59例，男39例，女20例，平均年龄为（59.36±7.21）岁，平均病程为（13.57±5.72）年。对照组46例，男24例，女22例，平均年龄为（45.15±7.28）岁。
2.2 各组血清Ang-1、Ang-2表达水平及Ang-1/Ang-2比值比较
与对照组比较，CHB组和肝硬化组Ang-1水平均降低（P值均<0.05）；与CHB组相比，肝硬化组Ang-1水平降低（P<0.001）。与对照组比较，CHB组和肝硬化组Ang-2水平均升高（P均<0.001）；与CHB组相比，肝硬化组Ang-2水平升高（P<0.001）。与对照组比较，CHB组和肝硬化组Ang-1/Ang-2的比值均降低（P值均<0.001）；与CHB组相比，肝硬化组Ang-1/Ang-2的比值降低（P<0.001）（表1，图1）。
表 1 各组血清Ang-1、Ang-2表达水平及Ang-1/Ang-2比值Table 1. The levels of Ang-1、Ang-2 and radio of Ang-1/Ang-2 in groups组别 例数 Ang-1（pg/mL） Ang-2（pg/mL） Ang-1/Ang-2 对照组 46 671.0（410.8～1 072.5） 198.0（149.3～263.1） 3.4（1.9～4.8） CHB组 99 479.0（320.9～740.0）1） 286.1（224.3～373.2）2） 1.6（0.8～2.6）2） 肝硬化组 59 208.4（140.1～370.0）1）3） 438.4（338.0～590.5）2）3） 0.5（0.2～0.9）2）3） χ2值 56.66 70.20 86.33 P值 <0.001 <0.001 <0.001 注：与对照组比较，1）P<0.05，2）P<0.001；与CHB组比较，3）P<0.001。 
图 1 各组血清Ang-1、Ang-2表达水平及Ang-1/Ang-2比值Figure 1. The levels of Ang-1、Ang-2 and radio of Ang-1/Ang-2 in groups2.3 CHB组和肝硬化组Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2比值与HBV DNA、ALT的相关性分析
CHB组及肝硬化组患者血清HBV DNA分别为3.78（1.91～6.01）、1.67（1.52～2.61） IU/mL，ALT分别为52.50（25.25～121.15）、26.00（18.60～41.10）U/L。Spearman相关分析结果显示，在CHB组，Ang-1与HBV DNA及ALT均呈负相关（P值均˂0.001）；Ang-2与HBV DNA及ALT均呈正相关（P值均˂0.001）；Ang-1/Ang-2与HBV DNA及ALT均呈负相关（P值均˂0.001）（表2）。在肝硬化组，分析结果显示Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2均与HBV DNA及ALT无相关性（P值均˃0.05）（表3）。
表 2 CHB组Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2比值与HBV DNA、ALT的相关性分析Table 2. Correlation analysis of Ang-1， Ang-2， and Ang-1/Ang-2 ratios with HBV DNA and ALT in hepatitis group指标 HBV DNA（IU/mL） ALT（U/L） r值 P值 r值 P值 Ang-1 -0.400 <0.001 -0.394 <0.001 Ang-2 0.365 <0.001 0.351 <0.001 Ang-1/Ang-2 -0.463 <0.001 -0.473 <0.001 表 3 肝硬化组Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2比值与HBV DNA、ALT的相关性分析Table 3. Correlation analysis of Ang-1， Ang-2， and Ang-1/Ang-2 ratios with HBV DNA and ALT in cirrhosis group指标 HBV DNA（IU/mL） ALT（U/L） r值 P值 r值 P值 Ang-1 0.204 0.121 -0.001 0.992 Ang-2 0.032 0.812 -0.089 0.501 Ang-1/Ang-2 0.141 0.287 0.007 0.960 3. 讨论
CHB、肝硬化的进展伴随着血管反应，研究［8-11］报道，血管生成素系统涉及感染性疾病、纤维化以及肿瘤等，但在CHB、肝硬化方面还未见报道。
Jeansson等［2］报道在组织损伤后，Ang-1在减轻组织损伤、减慢血管生成和纤维化方面发挥重要作用。Saharinen等［12］报道Ang-1的补充使各种小鼠疾病模型中的血管功能正常化，如减轻氧诱导的视网膜病变、脉络膜新生血管、糖尿病肾病、全身炎症、败血症和心脏同种异体移植的排斥反应。本研究显示，CHB组和肝硬化组与对照组比较，Ang-1的表达显著降低，表明其对肝组织的保护作用明显减弱，或许预示该患者肝组织损伤及炎症反应比较严重，且预后不良。
另有研究［13-19］报道，许多与血管功能失调相关的疾病，如败血症、癌症、糖尿病、严重创伤、疟疾和病毒性出血热中，Ang-2均显著增加。过多分泌的Ang-2破坏了血管内皮细胞的连接，导致大量的血浆渗出，血管异常增生；还可以增加血管内皮细胞对血管生长因子、致炎因子的敏感性［13，20］。本研究中，CHB组和肝硬化组与对照组比较，Ang-2的表达显著增加，拮抗Ang-1对肝组织及血管内皮细胞的保护作用，可能进一步加重了肝组织的损伤、炎症反应，甚至纤维化。
已有研究［5，21-22］报道，将Ang-2及Ang-2/Ang-1比值作为疾病严重程度、预后及治疗效果的生物标志物。本研究观察到，CHB、肝硬化患者血清Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2有显著改变，其中肝炎组Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2与HBV DNA和ALT有相关性。CHB组和肝硬化组与对照组相比，Ang-1/Ang-2比值显著降低。Ang-1和Ang-2是相互拮抗、相互制约的关系，笔者认为不论Ang-1或Ang-2增加或减少，只要其比值在正常范围，表明肝组织的损伤及炎症反应就相对比较轻微；反之，当Ang-2显著增加，Ang-1不增反降，Ang-1/Ang-2比值明显降低时，表明炎症反应比较重，预后不良。
综上所述，在CHB阶段Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2比值与患者HBV感染及肝损伤程度相关，或许可作为指导CHB治疗和预测CHB患者预后的临床指标之一。
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图 1 各组血清Ang-1、Ang-2表达水平及Ang-1/Ang-2比值
Figure 1. The levels of Ang-1、Ang-2 and radio of Ang-1/Ang-2 in groups
表 1 各组血清Ang-1、Ang-2表达水平及Ang-1/Ang-2比值
Table 1. The levels of Ang-1、Ang-2 and radio of Ang-1/Ang-2 in groups
组别 例数 Ang-1（pg/mL） Ang-2（pg/mL） Ang-1/Ang-2 对照组 46 671.0（410.8～1 072.5） 198.0（149.3～263.1） 3.4（1.9～4.8） CHB组 99 479.0（320.9～740.0）1） 286.1（224.3～373.2）2） 1.6（0.8～2.6）2） 肝硬化组 59 208.4（140.1～370.0）1）3） 438.4（338.0～590.5）2）3） 0.5（0.2～0.9）2）3） χ2值 56.66 70.20 86.33 P值 <0.001 <0.001 <0.001 注：与对照组比较，1）P<0.05，2）P<0.001；与CHB组比较，3）P<0.001。 
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表 2 CHB组Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2比值与HBV DNA、ALT的相关性分析
Table 2. Correlation analysis of Ang-1， Ang-2， and Ang-1/Ang-2 ratios with HBV DNA and ALT in hepatitis group
指标 HBV DNA（IU/mL） ALT（U/L） r值 P值 r值 P值 Ang-1 -0.400 <0.001 -0.394 <0.001 Ang-2 0.365 <0.001 0.351 <0.001 Ang-1/Ang-2 -0.463 <0.001 -0.473 <0.001
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表 3 肝硬化组Ang-1、Ang-2及Ang-1/Ang-2比值与HBV DNA、ALT的相关性分析
Table 3. Correlation analysis of Ang-1， Ang-2， and Ang-1/Ang-2 ratios with HBV DNA and ALT in cirrhosis group
指标 HBV DNA（IU/mL） ALT（U/L） r值 P值 r值 P值 Ang-1 0.204 0.121 -0.001 0.992 Ang-2 0.032 0.812 -0.089 0.501 Ang-1/Ang-2 0.141 0.287 0.007 0.960
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1. 孙秀荣，孙华溢，于燕民，李静. 五灵胶囊联合异甘草酸镁治疗慢性乙型肝炎的临床研究. 现代药物与临床. 2025(01): 139-144 . 
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