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邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)诱发小鼠胆汁淤积和肝损伤的作用机制

张佳怡 余芸 赵凡 叶露 王建青

引用本文:
Citation:

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)诱发小鼠胆汁淤积和肝损伤的作用机制

DOI: 10.12449/JCH240521
基金项目: 

国家自然科学基金 (82073566);

安徽省高校优秀青年人才支持计划资助项目 (gxyq2019014);

临床药学与药理学共建项目 (2020);

安徽省公共卫生临床中心安徽医科大学第一附属医院北区科研培育基金资助项目 (2023YKJ14);

安徽省公共卫生临床中心安徽医科大学第一附属医院北区科研培育基金资助项目 (2023YKJ06);

安徽省公共卫生临床中心安徽医科大学第一附属医院北区科研培育基金资助项目 (2023YKJ11)

医学伦理声明本研究于2020年5月23日经由安徽医科大学动物伦理委员会审批,批号:202000523,符合实验室动物管理与使用准则。
利益冲突声明:本文不存在任何利益冲突。
作者贡献声明:王建青、余芸、张佳怡负责课题设计,资料分析;张佳怡、余芸、赵凡、叶露参与收集数据,修改论文;王建青负责拟定写作思路,指导撰写文章并最后定稿。
详细信息
    通信作者:

    王建青, jianqingwang81@126.com (ORCID: 0000-0002-7935-9520)

Mechanism of bis(2-ethylhexyl) phthalate in inducing cholestasis and liver injury in mice

Research funding: 

National Natural Science Foundation of China (82073566);

The Program of Excellent Young Talents in Universities of Anhui Province (gxyq2019014);

Clinical Pharmacy and Pharmacology (2020);

Anhui Public Health Clinical Center Supported by North District Scientific Research and Cultivation Foundation of the First Affiliated Hospital of Anhui Medical University (2023YKJ14);

Anhui Public Health Clinical Center Supported by North District Scientific Research and Cultivation Foundation of the First Affiliated Hospital of Anhui Medical University (2023YKJ06);

Anhui Public Health Clinical Center Supported by North District Scientific Research and Cultivation Foundation of the First Affiliated Hospital of Anhui Medical University (2023YKJ11)

More Information
  • 摘要:   目的  探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)诱发小鼠胆汁淤积和肝损伤机制研究。  方法  体内实验:将成年雌性ICR小鼠随机分为对照组(玉米油)、DEHP组(200 mg·kg-1·d-1),共灌胃4周,建立胆汁淤积模型。收集所有小鼠血液与肝组织,生化仪检测血清、肝脏总胆汁酸(TBA)水平,酶标仪检测ALP、GGT;HE染色观察肝组织病理变化;实时定量PCR检测肝脏炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平;液相色谱-三重四级杆质谱仪(LC-MS/MS)检测小鼠肝脏胆汁酸谱。体外实验:培养小鼠肝细胞AML-12,使用DEHP(250 µmol/L)以及去氧胆酸(DCA)(125 µmol/L)和鹅去氧胆酸(CDCA)(125 µmol/L)处理细胞24 h,实时定量PCR检测细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA水平。计量资料两组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。  结果  体内实验显示:与对照组相比,DEHP组小鼠肝体比,血清TBA、ALP、GGT及肝脏TBA均显著升高(t值分别为-4.396、-5.109、-8.504、-3.792和-7.974,P值均<0.05)。与对照组相比,肝脏胆汁酸谱中胆酸(CA)、CDCA、牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)、DCA及熊去氧胆酸(UDCA)均显著升高(t值分别为-2.802、-3.177、-2.633、-2.874和-2.311,P值均<0.05)。DEHP组小鼠肝脏HE染色显示为汇管区扩大、胆管变形、胆管周围伴有炎性细胞浸润,且肝脏炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平均显著升高(t值分别为-2.539、-2.823和-4.636,P值均<0.05)。体外实验显示:0~1 000 µmol/L DEHP处理后肝细胞活力实际数值相差不超过15%,分别使用125、250以及500 µmol/L的DEHP刺激后,肝细胞的炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平均明显升高(P值均<0.05)。与单独使用DEHP刺激相比,CDCA联合DEHP刺激上调了细胞炎症因子IL-1β mRNA水平(P<0.01);DCA与DEHP联合刺激可显著增加细胞炎症因子IL-1β和IL-6的mRNA水平(P值均<0.01)。  结论  DEHP暴露导致小鼠胆汁淤积肝病的发生并诱发肝脏炎症,这可能与其促进有毒胆汁酸的产生进而加剧炎性因子分泌有关。

     

  • 图  1  小鼠肝体比、TBA、ALP和GGT水平

    Figure  1.  Mouse liver to body ratio, TBA, ALP, and GGT levels

    图  2  小鼠肝脏胆汁酸谱

    Figure  2.  Mouse liver bile acid profile

    图  3  小鼠肝脏HE染色和炎症因子表达水平

    Figure  3.  HE staining and expression of inflammatory factors in mouse liver

    图  4  DEHP暴露对肝细胞炎症因子水平的影响

    注: a,不同剂量DEHP处理24 h肝细胞存活率;b,肝细胞炎症因子mRNA水平。

    Figure  4.  Effects of DEHP exposure on levels of inflammatory cytokines in hepatocytes

    图  5  胆汁酸联合DEHP共培养对肝细胞炎症因子水平的影响

    注: a,不同剂量CDCA处理24 h细胞存活率;b,不同剂量DCA处理24 h细胞存活率;c,125 µmol/L CDCA和250 µmol/L DEHP处理肝细胞炎症因子mRNA水平;d,125 µmol/L DCA和250 µmol/L DEHP处理肝细胞炎症因子mRNA水平。

    Figure  5.  Effects of bile acids combined with DEHP on the levels of inflammatory cytokines in hepatocytes

    表  1  基因的引物序列

    Table  1.   Primers sequence of genes

    基因名称 引物序列(5'-3')
    18S F:GTAACCCGTTGAACCCCATT R:CCATCCAATCGGTAGTAGCG
    IL-1β F:AACTGCACTACAGGCTCCGAG R:TGCTTGGTTCTCCTTGTACAAAGC
    TNF-α F:AAAAGATGGGGGGCTTCCAGAA R:CCATTTGGGAACTTCTCATCCCTT
    IL-6 F:TCTATACCACTTCACAAGTCGGA R:GAATTGCCATTGCACAACTCTTT
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出版历程
  • 收稿日期:  2023-08-09
  • 录用日期:  2023-09-11
  • 出版日期:  2024-05-25
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