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松果菊苷对雨蛙素诱导的急性胰腺炎大鼠模型胰腺及肝损伤的影响与机制

马明和 达哇卓玛 刘川川 樊海宁

陈椿, 王可欣, 贺梦雯, 等. 沉默减数分裂内切酶1(EME1)抑制肝癌 细 胞 增 殖 的 机 制[J]. 临 床 肝 胆 病 杂 志 , 2024, 40(5): 982-988. DOI: 10.12449/JCH240518.
引用本文: 陈椿, 王可欣, 贺梦雯, 等. 沉默减数分裂内切酶1(EME1)抑制肝癌 细 胞 增 殖 的 机 制[J]. 临 床 肝 胆 病 杂 志 , 2024, 40(5): 982-988. DOI: 10.12449/JCH240518.
CHEN C, WANG KX, HE MW, et al. Silencing essential meiotic endonuclease 1 inhibits the proliferation of liver cancer cells: A study of related mechanisms[J]. J Clin Hepatol, 2024, 40(5): 982-988. DOI: 10.12449/JCH240518.
Citation: CHEN C, WANG KX, HE MW, et al. Silencing essential meiotic endonuclease 1 inhibits the proliferation of liver cancer cells: A study of related mechanisms[J]. J Clin Hepatol, 2024, 40(5): 982-988. DOI: 10.12449/JCH240518.

松果菊苷对雨蛙素诱导的急性胰腺炎大鼠模型胰腺及肝损伤的影响与机制

DOI: 10.12449/JCH240422
基金项目: 

青海省“昆仑英才·高端创新创业人才计划项目” 

伦理学声明:本研究方案经由青海大学附属医院伦理委员会审批,批准号:P-SL-2022-018,符合实验室动物管理与使用准则。
利益冲突声明:本文不存在任何利益冲突。
作者贡献声明:刘川川、樊海宁负责课题设计;马明和、达哇卓玛、刘川川参与收集数据,资料分析,撰写论文,修改论文;樊海宁负责拟定写作思路,指导撰写文章并最后定稿。
详细信息
    通信作者:

    刘川川, 18797331470@139.com (ORCID: 0000-0002-8885-2368)

    樊海宁, fanhaining@medmail.com.cn (ORCID: 0000-0001-7791-5725)

Effect of echinacoside intervention on liver and pancreas injury in rats with acute pancreatitis and its mechanism

Research funding: 

Qinghai Province “Kunlun Talents·High-end Innovative Talents” Project 

More Information
  • 摘要:   目的  通过建立急性胰腺炎(AP)大鼠模型,研究松果菊苷(ECH)对雨蛙素诱导的AP大鼠模型胰腺及肝损伤的改善作用及机制。  方法  24只SD大鼠随机分为空白组(Con组)、对照组(Con+ECH组)、AP组和AP+ECH组4组,每组各6只。AP模型构建前7 d给予10 mg/kg ECH腹腔注射,雨蛙素末次给药24 h后,腹主动脉取血,分离血清行ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)、GGT、ALP、Alb、TBil、胆碱酯酶(ChE)、血淀粉酶(Amy)、脂肪酶(LPS)等生化检测;HE染色检测胰腺和肝组织病理学改变;透射电镜观察胰腺和肝组织微观结构改变;ELISA检测肝组织匀浆中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平;免疫组化分析胰腺和肝组织中TNF-α和p-p65 NF-κB水平;Western Blot检测肝组织中NF-κB通路蛋白表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK-q或Dunnett’s T3检验。  结果  与Con组相比,AP组大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS指标均明显增高(P值均<0.01);肝组织匀浆液IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α水平均增加(P值均<0.01)。ECH干预降低AP大鼠ALT、AST、GGT、LDH、ALP、TBil、AMY、LPS水平,并能抑制IL-1β、IL-6、TNF-α的分泌。HE染色观察可见ECH干预后胰腺组织中腺泡细胞空泡变性和炎性细胞浸润较AP组减轻,肝细胞坏死较AP组减轻。透射电镜检查镜下见ECH干预后肝和胰腺细胞内线粒体肿胀程度较AP组减轻。ECH干预后能部分逆转AP大鼠胰腺和肝组织中p-p65 NF-κB、TNF-α的表达增加。此外,AP大鼠肝组织中MyD88、p-IκBα、p-IKKα、p-p65表达上调,而ECH干预后能部分逆转。  结论  松果菊苷可通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB途径来改善AP诱发的胰腺和肝损伤。

     

  • 肝细胞癌是全球癌症相关死亡的第三大常见原因,对于晚期肝癌患者,靶向治疗的效果仍不能满足临床需求1-5,寻找新的基因靶点可进一步提升疗效及安全性,成为目前肝癌治疗领域的研究热点。减数分裂内切酶1(essential meiotic endonuclease 1,EME1)编码的蛋白质可与MUS81形成核酸内切酶复合物,作用于特定的DNA底物,包括Holiday连接、3′末端翘翼结构以及复制叉结构,在DNA链间交联、DNA双链断裂后修复过程中对重组中间产物的分解发挥着关键作用6。既往研究7-9发现,EME1高表达是膀胱癌、乳腺癌及肾透明细胞癌不良预后的高危因素,但其在肝癌中的表达和作用尚未见报道。本研究从TCGA数据库入手,通过生物信息学寻找肝癌组织中的高表达基因EME1,并在肝癌组织/癌旁组织中进行验证,通过基因沉默探讨EME1对肝癌细胞生物学行为的影响,以期鉴定新的治疗靶点。

    人肝癌细胞BEL-7404/7402、Hep3B及人胚肾细胞293T均为本单位感染病研究所保存。慢病毒载体购自上海吉凯基因公司。鼠源EME1单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司,HRP标记山羊抗小鼠的二抗检测试剂盒购自北京中杉金桥公司。HiScript Ⅲ All-in one RT、SuperMix Perfect for qPCR逆转录试剂和Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix购自南京诺唯赞公司。RPMI 1640和MEM培养基购自美国Corning公司,胎牛血清(FBS)购自美国Geniala公司,四甲基偶氮唑盐(MTT)购自北京鼎国昌盛公司,Caspase-Glo® 3/7 Assay试剂盒购自美国Promega公司,碘化丙啶(PI)购自吉至生化公司。

    下载TCGA数据库中肝细胞癌样本的mRNA seq表达谱,利用R软件中的“edge”包筛选癌及癌旁组织中高表达基因。

    BEL-7404/7402细胞在含10%FBS的RPMI 1640细胞培养液、Hep3B细胞在含10%FBS的MEM细胞培养液中37 ℃、5% CO2条件下培养。细胞传代使用0.25%胰蛋白酶消化,按照1∶3比例传代。

    石蜡切片经脱蜡、水化、抗原修复后,FBS封闭后加入EME1一抗,4 ℃孵育过夜,加入二抗37 ℃孵育20 min,DAB显色,苏木精复染,中性树胶封片,镜检评分。染色结果进行半定量分析,以染色强度评分[阴性为0分,淡黄色(弱阳性)为1分,棕黄色(阳性)为2分,棕褐色(强阳性)为3分]和阳性细胞范围评分[≤25%为1分,26%~50%计为2分,51%~75%为3分,>75%为4分]乘积作为最终结果。

    EME1 短发夹RNA(shRNA)干扰序列为CTGAGAAGACAGGAAAGAA,两端分别添加AgeI(A^CCGGT)和EcoRI(G^AATTC)酶切位点黏性末端,并在正链3′端添加终止信号(TTTTT),反链5′端添加终止信号互补序列(AAAAA),合成DNA Oligo。双酶切hU6-MCS-CMV-EGFP慢病毒载体使其线性化,将DNA Oligo与载体质粒相连后转化感受态细胞,之后PCR扩增及测序鉴定(表1)。提取鉴定正确的质粒,利用第二代慢病毒包装系统,穿梭质粒GV115、包装质粒psPAX2、包膜质粒pMD2.G共转染293T细胞,转染后48 h进行病毒收获,浓缩与纯化慢病毒。

    表  1  EME1 shRNA引物序列
    Table  1.  Sequences of essential meiotic structure-specific endonuclease 1 shRNA
    名称 序列(5′-3′)
    shRNA 正义链:CCGGCCCTGAGAAGACAGGAAAGAAC TCGAGTTCTTTCCTGTCTTCTCAGGGTTTTTG
    反义链:AATTCAAAAACCCTGAGAAGACAGGAAAG AACTCGAGTTCTTTCCTGTCTTCTCAGGG
    shRNA-NC 正义链:CCGGTTCTCCGAACGTGTCACGTTTCA AGAGAAGTGACACGTTCGGAGAATTTTTG 反义链:AATTCAAAAATTCTCCGAACGTGTCAC GTTCTCTT GAAACGTGACACGTTCGGAGAA
    鉴定引物 正义链:CCTATTTCCCATGATTCCTTCATA
    反义链:GTAATACGGTTATCCACG
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    对数生长期的BEL-7404细胞接种于6孔板(2×105个/孔),培养至铺板量达30%后分别加入shRNA干扰表达慢病毒和阴性对照慢病毒,感染12 h后更换完全培养基继续培养。感染72 h后,荧光显微镜观察细胞感染效率。以GADPH为内参照,进行实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测(表2),2-△△Ct法计算EME1相对表达量。

    表  2  各基因引物序列
    Table  2.  primer sequences
    名称 序列(5′-3′)
    EME1 正义链: TGACTTCAACAGCGACACCCA
    反义链: CACCCTGTTGCTGTAGCCAAA
    GAPDH 正义链: TCTGAGGAGTTGCCAACATTTG
    反义链: GGCTTCACAATCTGAGATGTCAA
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    制备样品,每孔上样量为30 μg,10%的SDS-PAGE电泳分离,并转移到PVDF膜上,室温封闭1 h,一抗(1∶800)4 ℃孵育过夜,TBST洗膜。二抗(1∶5 000)室温孵育1 h,TBST洗膜。化学发光法(ECL法)检测条带,以GAPDH为内参照,用Image J软件进行灰度值分析。

    对数生长期细胞接种于96孔板(2×103个/孔),每天用Celigo检测读板。另设置一组进行MTT检测,培养终止前4 h加入5 mg/mL的MTT溶液20 μL,继续培养4 h后吸取培养液,每孔加入100 μL二甲基亚砜,振荡器振荡2 min,检测490 nm处的吸光值。

    对数生长期细胞接种于6孔板(800个/孔),持续培养10 d后使用4%多聚甲醛固定细胞30 min,PBS洗涤后加入500 μL/孔吉姆萨染液(10 min),ddH2O洗涤细胞,晾干后拍照并克隆计数。

    对数生长期细胞接种于96孔板(1×104个/孔),Caspase-Glo3/7缓冲液10 mL溶解Caspase-Glo3/7冻干粉,每孔加入Caspase-Glo反应液100 μL,500 r/min离心30 min,室温孵育2 h后使用酶标仪测定信号强度。

    收集处于对数生长期的细胞,用4 ℃预冷的D-Hanks洗涤细胞并沉淀,用4 ℃预冷的75%乙醇固定细胞1 h。1 300 r/min离心5 min,去固定液,用4 ℃预冷的D-Hanks洗涤细胞沉淀1次。加入1 mL的细胞染色液重悬,上机检测。

    采用R语言软件4.2.1进行统计分析,每个实验均设置3个复孔,数据以x¯±s表示,两组间比较采用成组t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

    TCGA数据库筛选出50对肝癌样本,EME1 mRNA在肝癌组织(114.5±153.0)的表达量是癌旁组织(8.0±7.2)的18.9倍(t=5.00,P<0.001)(图1a)。RT-qPCR结果显示,人肝癌细胞BEL-7404/7402和Hep3B中EME1 mRNA相对表达量(ΔCT值)分别为9.25、10.32和10.89,均<12,为高丰度表达(图1b)。

    注: a,TCGA数据库分析EME1 mRNA表达水平;b,BEL-7404/7402、Hep3B细胞的EME1 mRNA表达水平。
    图  1  EME1 mRNA在肝癌/癌旁组织中的表达情况
    Figure  1.  Expression level of EME1 mRNA in HCC/paracancerous tissues

    选取病理确诊的3例肝癌患者的手术切除癌/癌旁组织进行Western Blot分析,结果显示肝癌组织EME1蛋白水平(249.0%± 35.5%)是癌旁组织(100.0%±77.8%)的2.5倍(t=3.02,P<0.05)(图2a、b)。选取病理确诊的5例肝癌患者的手术切除肝癌组织/癌旁组织进行免疫组化分析,结果显示肝癌组织EME1蛋白水平(8.4±2.6)是癌旁组织(1.2±0.4)的7.0倍(t=7.55,P<0.001)(图2c、d)。

    注: a,Western Blot结果;b,Western Blot的定量分析;c,免疫组化结果(×200);d,免疫组化的半定量分析。
    图  2  EME1在肝癌/癌旁组织中的表达情况
    Figure  2.  Expression level of EME1 in HCC/paracancerous tissues

    荧光倒置相差显微镜观察慢病毒感染72 h后的BEL-7404细胞,结果显示感染效率达到80%以上,细胞状态正常(图3)。RT-qPCR结果显示,沉默组(shEME1)EME1 mRNA表达水平(29.9%±0.9%)相较于阴性对照组(shCtrl)(100.0%± 3.6%)显著降低(t=32.82,P<0.001)(图4a);Western Blot结果显示,shEME1组EME1蛋白表达水平(35.7%±14.9%)相较于shCtrl组(100.0%±28.9%)显著降低(t=3.42,P<0.05)(图4b),表明EME1稳定沉默的肝癌细胞株BEL-7404构建成功。

    图  3  慢病毒感染BEL-7404细胞48 h后荧光显微镜结果(×100)
    Figure  3.  Fluorescence microscopie observation of BEL-7404 after transfection for 48 hours (×100)
    注: a,RT-qPCR检测不同处理组EME1 mRNA表达水平;b,Western Blot检测不同处理组EME1蛋白表达水平。
    图  4  BEL-7404细胞的EME1沉默效率
    Figure  4.  EME1 silencing efficiency in BEL-7404 cells

    Celigo观察培养1~5天的BEL-7404细胞,结果显示随着培养时间的延长,相对于对照组,沉默组细胞数量显著下降,培养5天时沉默组为4 053±167,对照组为8 988±477,细胞数量下降了45.1%(t=16.91,P<0.001)(图5a、b)。MTT检测培养1~5天的BEL-7404细胞在490 nm处的吸光值,相对于对照组,沉默组细胞吸光值显著下降,培养5天时沉默组为0.518±0.046,对照组为0.774±0.022,细胞活性下降了66.9%(t=8.74,P<0.001)(5c)。培养10天后,沉默组克隆数(75±6)较对照组(260±9)显著减少,细胞克隆形成能力下降了29.0%(t=28.92,P<0.001)(图5d、e)。表明沉默EME1降低BEL-7404细胞的增殖能力。

    注: a,Celigo计数仪在荧光视野下对BEL-7404细胞的单视野成像;b,Celigo计数仪计数单孔BEL-7404细胞的数量;c,MTT法检测BEL-7404细胞的增殖情况;d、e,BEL-7404细胞的克隆形成情况与克隆计数。
    图  5  不同处理组BEL-7404细胞的增殖情况
    Figure  5.  Proliferation of BEL-7404 cells in different treatment groups

    流式细胞术检测慢病毒感染5天后的BEL-7404细胞周期,沉默组的G1期细胞比例显著高于对照组(49.9%±0.8% vs 44.0%±0.9%,t=8.96,P<0.001),G2/M期细胞比例显著低于对照组(15.9%±0.2% vs 17.9%±0.7%,t=9.13,P<0.001),S期细胞比例显著低于对照组(34.2%±0.6% vs 38.1%±0.5%,t=6.91,P<0.001)(图6)。

    图  6  不同处理组BEL-7404细胞周期情况
    Figure  6.  Cell cycle of BEL-7404 cells in different treatment groups

    Caspase3/7活性分析显示感染shRNA慢病毒5天后,沉默组细胞的Caspase3/7活性(145.8%±5.9%)较对照组组(100.0%± 2.3%)显著升高1.5倍(t=12.50,P<0.001)(图7)。

    图  7  不同处理组BEL-7404细胞的Caspase3/7活性
    Figure  7.  Caspase3/7 activity of BEL-7404 cells in the negative control group and the experimental group

    EME1对于哺乳动物细胞中 DNA 代谢的各个方面都很重要,Guo等10研究发现EME1与胃癌细胞AGS和MGC-803的增殖及侵袭能力密切相关,沉默EME1基因表达可通过抑制蛋白激酶B活化,降低糖原合酶激酶-3β、细胞周期蛋白D1,从而抑制癌细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡。基于中国广西人群的研究11发现EME1的Glu69Asp错义多态性与肝癌风险增加显著相关。EME1的另一外显子Ile350Thr变异会提高乳腺癌的易感性12

    本研究发现沉默EME1的表达可降低肝癌的增殖能力。正常细胞中同源重组(homologous recombination,HR)相关蛋白受到高度的调控,对DNA序列具有相当高的特异性,一旦失调就会导致基因组的不稳定性。MUS81/EME1在异常的时间节点被激活,可能会导致细胞周期的阻滞、DNA向子细胞的不对称分布以及非整倍体。相反,过早的磷酸化会刺激Holiday连接交叉。HR途径的过表达可能引起DNA重排,导致癌基因活化或者抑癌基因的杂合性的缺失13。HR介导基因表型的持续变化为肿瘤细胞提供生长优势,恶性表型的不断发展以及耐药性的产生。有研究14发现,多发性骨髓瘤细胞和患者样本中的HR酶活性升高密切相关,抑制HR活性可显著减少新基因表型的产生,上调HR活性会增加基因突变的数量。持续获得HR介导的新基因,可能会导致癌基因的激活,促进肿瘤或耐药表型的获得。笔者推测高表达水平的EME1蛋白可能通过催化DNA-RNA杂交的形成导致基因组不稳定,或通过促成同源性驱动的易出错过程(如单链退火、复制模板切换和非等位HR)来促进突变。

    结果表明,沉默EME1表达后Caspase3/7活性显著增高,有效促进细胞凋亡。细胞凋亡主要由Caspase家族蛋白酶执行,Caspase3/7负责对特定的细胞底物进行关键的切割,导致最终的凋亡细胞死亡。癌前病变的DNA损伤可通过诱导细胞凋亡来清除潜在的有害细胞从而阻断肿瘤生长。这一死亡过程的失控与异常的细胞增殖、肿瘤的发生和进展有关,细胞凋亡的失调被认为是癌症的标志之一15。本研究同时发现沉默EME1表达后G1期细胞比例高于shCtrl组,表明抑制EME1表达能有效阻滞细胞周期,抑制肿瘤细胞生长。EME1虽然在G2/M期活性受到严格的调控,但其在细胞全周期中都能检测到。有研究16证明有丝分裂中Cdk1活性的失调,会过早激活MUS81/EME1的有丝分裂同源重组,可能会诱导DNA损伤应答缺陷相关的细胞周期改变。蛋白激酶2(CK2)通过磷酸化调控MUS81/EME1复合物的活性,从而在有丝分裂和DNA复制应激后发挥不同的功能。在细胞有丝分裂过程中,CK2通过磷酸化MUS81/EME1增强其活性,有助于维持基因组的稳定性。但在细胞受到DNA复制应激后,CK2过度活化MUS81/EME1复合物会导致DNA损伤和染色体不稳定性17。事实上,已经在许多肿瘤中发现CK2过表达18-19,因此可以推测CK2可通过提高MUS81/EME1的生物学功能,促进人类基因组的不稳定性,还需要进一步研究确定肝癌中CK2的表达水平与MUS81/EME1的关系。在检查点激酶缺陷1的细胞中,由于核苷酸的缺乏不足以维持有丝分裂期DNA合成,MUS81/EME1复合物切割有丝分裂期间合成的新生DNA20。这种机制并不会导致细胞的死亡,而是造成子细胞遗传了受损的DNA,MUS81/EME1复合物对晚期复制产物的异常处理会导致基因组不稳定。在FIBP敲低的肺腺癌中,EME1的过表达逆转了其对肺腺癌细胞增殖的抑制作用21。该研究结果显示,EME1的过表达显著减少了γ-H2AX病灶形成,表明EME1参与肺腺癌细胞增殖和放射耐药性。FIBP与STAT3互作通过增强其磷酸化从而提高转录活性,并诱导靶基因EME1的表达。外源性STAT3的过表达也提高了FIBP缺陷肺腺癌细胞中的EME1表达水平,这一结果在另一项研究22中也得到证实。此外,肿瘤细胞中的某些特异性的细胞因子常通过结合EME1的启动子上调其表达。

    综上,EME1在肝癌组织中高表达,并在细胞功能学层面证明了沉默EME1基因可抑制肝癌细胞的增殖,阻滞细胞周期,诱导肝癌细胞的凋亡,为临床治疗提供了新思路。此外本研究对EME1在肝癌中发生发展限于细胞的功能性实验,后续还需对动物模型和分子机制进行下一步的探索。

  • 图  1  ECH对AP大鼠模型血清AMY和LPS活性的影响

    Figure  1.  The effects of Echinacoside on serum amylase and lipase activity in rats with Cerulein-induced acute pancreatitis

    图  2  胰腺干湿重比

    Figure  2.  The ratio of dry to wet weight of the pancreas

    注: a,Con组;b,AP组;c,ECH组;d,AP+ECH组

    图  3  ECH对AP大鼠胰腺组织病理学改变的影响(HE染色,×400)

    Figure  3.  The effect of Echinacoside on the pancreatic morphology of rats with AP(HE staining,×400)

    注: a,Con组;b,AP组;c,ECH组;d,AP+ECH组

    图  4  ECH对AP大鼠肝脏组织病理学改变的影响(HE染色,×400)

    Figure  4.  The effect of Echinacoside on the hepatic morphology of rats with AP (HE staining,×400)

    注: a,Con组(×25 000);b,AP组(×8 000);c,ECH组(×25 000);d,AP+ECH组(×8 000)。N:细胞核;Mi:线粒体;APG:自噬体。

    图  5  TEM观察肝组织微观结构变化

    Figure  5.  Changes of hepatic microscopic structure under TEM

    注: a,Con组(×25 000);b,AP组(×8 000);c,ECH组(×25 000);d,AP+ECH组(×8 000)。ZG:酶原颗粒;ER:内质网。

    图  6  TEM观察胰腺组织微观结构变化

    Figure  6.  Changes of pancreatic microscopic structure under TEM

    图  7  大鼠IL1β、IL-6、TNF-α、IL-10炎症因子变化水平

    Figure  7.  Change levels of inflammatory factors of IL-1β, IL-6, TNF-α and IL-10 in rats

    图  8  免疫组化分析胰腺和肝组织中NF-κB p65、TNF-α表达水平

    Figure  8.  The expression levels of NF-κB p65 and TNF-α in pancreatic and hepatic tissues with Immunohistochemical analysis

    图  9  Western Blot分析肝组织中NF-κB信号通路蛋白表达水平

    Figure  9.  The expression levels of NF-κB p65 signaling pathway protein in hepatic tissues with Western blot

    表  1  ECH对雨蛙素诱导AP大鼠肝酶水平的影响

    Table  1.   The effects of Echinacoside on hepatic enzyme in rats with Cerulein-induced acute pancreatitis

    项目 Con组(n=6) Con+ECH组(n=6) AP组(n=6) AP+ECH组(n=6) F P
    ALT(U/L) 37.35±11.04 32.95±9.90 185.07±33.581) 101.05±21.883) 66.53 <0.01
    AST(U/L) 138.67±45.21 155.72±52.61 588.58±91.761) 329.28±85.663) 50.93 <0.01
    GGT(U/L) 27.13±5.98 27.92±5.35 74.78±22.351) 43.80±11.653) 17.03 <0.01
    Alb(U/L) 38.05±2.66 38.72±1.80 15.40±3.821) 27.82±3.343) 79.53 <0.01
    ChE(U/L) 114.60±19.36 117.87±21.63 58.35±12.251) 93.95±8.193) 16.96 <0.01
    LDH(U/L) 389.72±125.35 381.48±120.51 642.20±155.95 440.87±120.55 5.17 <0.01
    ALP(U/L) 26.43±4.56 26.70±5.22 55.88±14.371) 35.77±7.333) 14.88 <0.01
    TBil(μmol/L) 5.02±1.00 5.46±1.17 11.56±2.731) 6.25±1.723) 17.34 <0.01
    注:与Con组比较,1)P<0.01,2)P<0.05;与AP组比较,3)P<0.01。
    下载: 导出CSV
  • [1] MASAMUNE A, HAMADA S, KIKUTA K. Implementation of pancreatitis bundles is associated with reduced mortality in patients with severe acute pancreatitis in Japan[J]. Pancreas, 2021, 50( 2): e24- e25. DOI: 10.1097/MPA.0000000000001750.
    [2] XIAO AY, TAN MLY, WU LM, et al. Global incidence and mortality of pancreatic diseases: A systematic review, meta-analysis, and meta-regression of population-based cohort studies[J]. Lancet Gastroenterol Hepatol, 2016, 1( 1): 45- 55. DOI: 10.1016/S2468-1253(16)30004-8.
    [3] KONG LJ, ZHANG HW, LU CS, et al. AICAR, an AMP-activated protein kinase activator, ameliorates acute pancreatitis-associated liver injury partially through Nrf2-mediated antioxidant effects and inhibition of NLRP3 inflammasome activation[J]. Front Pharmacol, 2021, 12: 724514. DOI: 10.3389/fphar.2021.724514.
    [4] FU ZF, FAN X, WANG XY, et al. Cistanches Herba: An overview of its chemistry, pharmacology, and pharmacokinetics property[J]. J Ethnopharmacol, 2018, 219: 233- 247. DOI: 10.1016/j.jep.2017.10.015.
    [5] SONG YL, ZENG KW, JIANG Y, et al. Cistanches Herba, from an endangered species to a big brand of Chinese medicine[J]. Med Res Rev, 2021, 41( 3): 1539- 1577. DOI: 10.1002/med.21768.
    [6] WANG NQ, JI SZ, ZHANG H, et al. Herba cistanches: Anti-aging[J]. Aging Dis, 2017, 8( 6): 740- 759. DOI: 10.14336/AD.2017.0720.
    [7] WANG YH, XUAN ZH, TIAN S, et al. Echinacoside protects against 6-hydroxydopamine-induced mitochondrial dysfunction and inflammatory responses in PC12 cells via reducing ROS production[J]. Evid Based Complement Alternat Med, 2015, 2015: 189239. DOI: 10.1155/2015/189239.
    [8] LU CW, HSIEH HL, LIN TY, et al. Echinacoside, an active constituent of Cistanche herba, exerts a neuroprotective effect in a kainic acid rat model by inhibiting inflammatory processes and activating the akt/GSK3β pathway[J]. Biol Pharm Bull, 2018, 41( 11): 1685- 1693. DOI: 10.1248/bpb.b18-00407.
    [9] YANG L, ZHANG X, LIAO M, et al. Echinacoside improves diabetic liver injury by regulating the AMPK/SIRT1 signaling pathway in db/db mice[J]. Life Sci, 2021, 271: 119237. DOI: 10.1016/j.lfs.2021.119237.
    [10] LI W, ZHOU J, ZHANG YJ, et al. Echinacoside exerts anti-tumor activity via the miR-503-3p/TGF-β1/Smad aixs in liver cancer[J]. Cancer Cell Int, 2021, 21( 1): 304. DOI: 10.1186/s12935-021-01890-3.
    [11] CHEN XT, YANG YS, CHEN K, et al. Advances in the research of experimental animal models of acute pancreatitis[J]. Chin J Gen Pract, 2017, 15( 5): 857- 860. DOI: 10.16766/j.cnki.issn.1674-4152.2017.05.039.

    陈杏田, 杨元生, 陈垦, 等. 急性胰腺炎实验动物模型的研究进展[J]. 中华全科医学, 2017, 15( 5): 857- 860. DOI: 10.16766/j.cnki.issn.1674-4152.2017.05.039.
    [12] HYUN JJ, LEE HS. Experimental models of pancreatitis[J]. Clin Endosc, 2014, 47( 3): 212- 216. DOI: 10.5946/ce.2014.47.3.212.
    [13] MCGILL MR, JAESCHKE H. Animal models of drug-induced liver injury[J]. Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis, 2019, 1865( 5): 1031- 1039. DOI: 10.1016/j.bbadis.2018.08.037.
    [14] BARBALAT R, LAU L, LOCKSLEY RM, et al. Toll-like receptor 2 on inflammatory monocytes induces type I interferon in response to viral but not bacterial ligands[J]. Nat Immunol, 2009, 10( 11): 1200- 1207. DOI: 10.1038/ni.1792.
    [15] FUREY C, BUXBAUM J, CHAMBLISS AB. A review of biomarker utilization in the diagnosis and management of acute pancreatitis reveals amylase ordering is favored in patients requiring laparoscopic cholecystectomy[J]. Clin Biochem, 2020, 77: 54- 56. DOI: 10.1016/j.clinbiochem.2019.12.014.
    [16] HOESEL B, SCHMID JA. The complexity of NF-κB signaling in inflammation and cancer[J]. Mol Cancer, 2013, 12: 86. DOI: 10.1186/1476-4598-12-86.
    [17] ZHANG H, SHAN Y, WU Y, et al. Berberine suppresses LPS-induced inflammation through modulating Sirt1/NF-‍κB signaling pathway in RAW264.7 cells[J]. Int Immunopharmacol, 2017, 52: 93- 100. DOI: 10.1016/j.intimp.2017.08.032.
    [18] LAPIERRE P, BÉLAND K, ALVAREZ F. Pathogenesis of autoimmune hepatitis: From break of tolerance to immune-mediated hepatocyte apoptosis[J]. Transl Res, 2007, 149( 3): 107- 113. DOI: 10.1016/j.trsl.2006.11.010.
    [19] LAN DT, HE L, LI MD, et al. Echinacoside improves liver damage and inflammatory response in septic rats by activating Nrf pathway[J]. Chin J Immunol, 2020, 36( 4): 428- 432, 438. DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2020.04.09.

    兰戴天, 何力, 李茂德, 等. 松果菊苷改善脓毒症大鼠的肝损伤和炎症反应与激活Nrf通路相关[J]. 中国免疫学杂志, 2020, 36( 4): 428- 432, 438. DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2020.04.09.
    [20] WANG H, ZHANG XQ. Observation on Curative Effect of Huaxian Rougan Liquid Combined with Western Medicine in Treatment of Liver Fibrosis due to Hepatitis B and Effects on Serum IL-6, TNF-α and TGF-β1[J]. Chin J Tradit Med Sci Technol, 2022, 29( 4): 579- 581.

    王欢, 张晓强. 化纤柔肝饮辅助西药治疗乙型肝炎肝纤维化的效果观察及对血清IL-6、TNF-α及TGF-β1水平的影响[J]. 中国中医药科技, 2022, 29( 4): 579- 581.
    [21] FENG WW, WU AB, WANG HB. Effect of apigenin on the expressions of IL-1β, IL-6, TNF-α in rats with hepatic ischemia-reperfusion injury[J]. Chin J Gen Pract, 2019, 17( 2): 183- 185. DOI: 10.16766/j.cnki.issn.1674-4152.000634.

    冯韦韦, 吴爱兵, 王宏宾. 芹菜素对肝缺血-再灌注大鼠IL-1β、IL-6及TNF-α表达的影响[J]. 中华全科医学, 2019, 17( 2): 183- 185. DOI: 10.16766/j.cnki.issn.1674-4152.000634.
    [22] LIU JK, ZHAO WX, XU SC. Effects of Tuihuang mixture on endotoxin and levels of TNF-α, IL-1β and IL-6 in rats with acute liver failure[J]. Lishizhen Med Mater Med Res, 2015, 26( 3): 587- 588. DOI: 10.3969/j.issn.1008-0805.2015.03.026.

    刘江凯, 赵文霞, 许顺畅. 退黄合剂对急性肝衰竭大鼠内毒素及TNF-α、IL-1β、IL-6水平的影响[J]. 时珍国医国药, 2015, 26( 3): 587- 588. DOI: 10.3969/j.issn.1008-0805.2015.03.026.
    [23] UEMATSU S, FUJIMOTO K, JANG MH, et al. Regulation of humoral and cellular gut immunity by Lamina propria dendritic cells expressing Toll-like receptor 5[J]. Nat Immunol, 2008, 9( 7): 769- 776. DOI: 10.1038/ni.1622.
    [24] YAROVINSKY F, ZHANG DK, ANDERSEN JF, et al. TLR11 activation of dendritic cells by a protozoan profilin-like protein[J]. Science, 2005, 308( 5728): 1626- 1629. DOI: 10.1126/science.1109893.
    [25] YAMAMOTO M, TAKEDA K. Current views of toll-like receptor signaling pathways[J]. Gastroenterol Res Pract, 2010, 2010: 240365. DOI: 10.1155/2010/240365.
    [26] TANIGUCHI K, KARIN M. NF-κB, inflammation, immunity and cancer: Coming of age[J]. Nat Rev Immunol, 2018, 18( 5): 309- 324. DOI: 10.1038/nri.2017.142.
    [27] JIN JL, YU XF, HU ZC, et al. Isofraxidin targets the TLR4/MD-2 axis to prevent osteoarthritis development[J]. Food Funct, 2018, 9( 11): 5641- 5652. DOI: 10.1039/c8fo01445k.
    [28] KUZMICH NN, SIVAK KV, CHUBAREV VN, et al. TLR4 signaling pathway modulators as potential therapeutics in inflammation and sepsis[J]. Vaccines, 2017, 5( 4): 34. DOI: 10.3390/vaccines5040034.
    [29] ZHANG XS, XUE CY, XU Q, et al. Caprylic acid suppresses inflammation via TLR4/NF-κB signaling and improves atherosclerosis in ApoE-deficient mice[J]. Nutr Metab, 2019, 16: 40. DOI: 10.1186/s12986-019-0359-2.
    [30] WAN ZH, ZENG L, ZHOU H, et al. Protective effect of polyphyllin Ⅶ on acute lung injury in rats with severe acute pancreatitis by inhibiting NF-κB signaling pathway[J]. J Jilin Univ Med Ed, 2022, 48( 3): 668- 675. DOI: 10.13481/j.1671-587X.20220315.

    万朝辉, 曾良, 周辉, 等. 重楼皂苷Ⅶ通过抑制NF-κB信号通路对重症急性胰腺炎大鼠急性肺损伤的保护作用[J]. 吉林大学学报(医学版), 2022, 48( 3): 668- 675. DOI: 10.13481/j.1671-587X.20220315.
    [31] SONG IJ, YANG YM, INOKUCHI-SHIMIZU S, et al. The contribution of toll-like receptor signaling to the development of liver fibrosis and cancer in hepatocyte-specific TAK1-deleted mice[J]. Int J Cancer, 2018, 142( 1): 81- 91. DOI: 10.1002/ijc.31029.
    [32] ZOU M, YANG L, NIU L, et al. Baicalin ameliorates Mycoplasma gallisepticum-induced lung inflammation in chicken by inhibiting TLR6-mediated NF-κB signalling[J]. Br Poult Sci, 2021, 62( 2): 199- 210. DOI: 10.1080/00071668.2020.1847251.
    [33] ZHANG HL, JIA CX, LI HO, et al. Shenshao decoction improves myocardial inflammatory injury in diabetic rats by regulation of TLR4/MyD88 pathway[J]. Chin J Comp Med, 2017, 27( 8): 28- 33. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.08.006.

    张红利, 贾春新, 李海鸥, 等. 参芍口服液调控TLR4/MyD88通路改善糖尿病大鼠心肌炎症损伤[J]. 中国比较医学杂志, 2017, 27( 8): 28- 33. DOI: 10.3969.j.issn.1671-7856.2017.08.006.
    [34] LIU MJ, XIE JH, SUN YX. TLR4/MyD88/NF-κB-mediated inflammation contributes to cardiac dysfunction in rats of PTSD[J]. Cell Mol Neurobiol, 2020, 40( 6): 1029- 1035. DOI: 10.1007/s10571-020-00791-9.
    [35] DANG L, SONG L, ZHANG XQ, et al. Chaiqinchengqi decoction alleviates liver injury during severe acute pancreatitis in mice via inhibition of TLR4/NF-κB p65 pathway[J]. Chin Pharmacol Bull, 2020, 36( 1): 134- 139. DOI: 10.3969/j.issn.1001-1978.2020.01.026.

    党琳, 宋亮, 张晓芹, 等. 柴芩承气汤通过抑制TLR4/NF-κB p65通路减轻小鼠重症急性胰腺炎并发肝损伤[J]. 中国药理学通报, 2020, 36( 1): 134- 139. DOI: 10.3969/j.issn.1001-1978.2020.01.026.
    [36] LU B, YU YQ, YIN JJ, et al. Effects of PPAR-γ agonists on liver cells in rats correlate with NF-kappa B/TLR4 signal pathway during acute pancreatitis[J]. China Mod Dr, 2016, 54( 33): 30- 33, 169.

    陆贝, 于源泉, 殷俊杰, 等. NF-κB/TLR4信号通路在急性胰腺炎大鼠肝损伤中的表达及PPAR-γ激动剂的保护作用[J]. 中国现代医生, 2016, 54( 33): 30- 33, 169.
    [37] ZHANG JS, ZHANG ZN, XIANG J, et al. Neuroprotective effects of echinacoside on regulating the stress-active p38MAPK and NF-κB p52 signals in the mice model of Parkinson’s disease[J]. Neurochem Res, 2017, 42( 4): 975- 985. DOI: 10.1007/s11064-016-2130-7.
    [38] ZHANG YF, WU QF, ZHONG LM, et al. Echinacoside promotes the proliferation of human renal tubular epithelial cells by blocking the HBX/TREM2-mediated NF-κB signalling pathway[J]. Mol Med Rep, 2020, 22( 2): 1137- 1144. DOI: 10.3892/mmr.2020.11201.
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出版历程
  • 收稿日期:  2023-07-03
  • 录用日期:  2023-10-10
  • 出版日期:  2024-04-25
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