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平足蛋白(PDPN)在肝星状细胞活化以及肝纤维化中的作用分析

王知意 杨广越 张玮 浦娅琼 赵鑫 马文婷 刘旭凌 吴柳 陶乐 刘成

引用本文:
Citation:

平足蛋白(PDPN)在肝星状细胞活化以及肝纤维化中的作用分析

DOI: 10.12449/JCH240316
基金项目: 

上海市自然科学基金 (20ZR1450300)

国家自然科学基金 (82004106)

上海市普陀区自主创新项目 (ptkwws202112)

上海市普陀区自主创新项目 (ptkwws202223)

上海市普陀区中心医院科研百人计划 (2022-RCJC-02)

上海市普陀区中心医院科研百人计划 (2022-RCJC-04)

上海市普陀区中心医院科研百人计划 (2022-RCLH-01)

普陀杏林优青培养计划 (ptxlyq2301)

伦理学声明:临床研究于2020年8月12日经由上海中医药大学附属普陀医院伦理委员会审批,批号:PTEC-2020-32(Y)-1,符合临床研究伦理规范。动物实验于2022年6月30日由上海中医药大学附属普陀医院实验动物伦理委员会审批,批号:QWEC-A-202206008,符合实验室动物管理与使用准则。
利益冲突声明:本文不存在任何利益冲突。
作者贡献声明:王知意、杨广越、张玮、赵鑫负责实验操作及资料分析,撰写论文;马文婷、刘旭凌、吴柳、浦娅琼参与收集数据,修改论文;刘成、陶乐负责课题设计,指导撰写文章并最后定稿。
详细信息
    通信作者:

    陶乐, talent901036@163.com (ORCID: 0000-0002-3659-8134)

    刘成, liucheng0082010@163.com (ORCID: 0000-0002-8741-6169)

Role of podoplanin in hepatic stellate cell activation and liver fibrosis

Research funding: 

Shanghai Natural Science Foundation (20ZR1450300);

National Natural Science Foundation of China (82004106);

Indenpent Innovation of Shanghai Putou District Project (ptkwws202112);

Indenpent Innovation of Shanghai Putou District Project (ptkwws202223);

Project of “100 Professionals Training Plan” of Shanghai Putuo District Central Hospital (2022-RCJC-02);

Project of “100 Professionals Training Plan” of Shanghai Putuo District Central Hospital (2022-RCJC-04);

Project of “100 Professionals Training Plan” of Shanghai Putuo District Central Hospital (2022-RCLH-01);

Putuo Xinglin Excellent Youth Training Program (ptxlyq2301)

More Information
  • 摘要:   目的  探究平足蛋白(PDPN)在肝星状细胞活化以及肝纤维化中的作用,并对其机制进行初步探讨。  方法  收集2019年9月—2022年6月首次就诊于上海中医药大学附属普陀医院感染科的75例慢性乙型肝炎患者肝活检组织样本,实时定量PCR(RT-PCR)和免疫组化检测PDPN在不同肝纤维化分期患者肝组织中的表达。12只雄性C57/BL6小鼠随机分为正常组和模型组,每组各6只。模型组腹腔注射含10% CCl4,对照组注射等体积橄榄油共6周,HE染色、天狼星红染色观察肝组织病理学变化,分离小鼠肝脏原代细胞,检测PDPN mRNA在各类型细胞中表达;使用PDPN蛋白处理小鼠原代肝星状细胞,并使用NF-κB抑制剂BAY11-7082处理,分析PDPN诱导肝星状细胞炎症因子表达情况。计量资料2组间比较采用成组t检验,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。两组数据相关性分析采用Spearman相关性分析法。  结果  慢性乙型肝炎患者肝活检样本中,PDPN mRNA在正常肝脏中表达较低,S3、S4期肝组织中表达显著升高,与正常肝组织比较差异均有统计学意义(P值均<0.001);免疫组化染色结果显示,PDPN阳性表达主要集中在纤维间隔及肝窦,S4期肝组织PDPN阳性面积比S0期表达显著升高(t=8.892,P=0.001)。正常组小鼠中PDPN主要在肝窦表达少许,在CCl4模型小鼠中PDPN表达显著升高(t=0.95,P<0.001),主要在纤维间隔表达;RT-PCR结果显示,PDPN mRNA在CCl4模型小鼠中显著升高(t=11.25,P=0.002)。与肝细胞、肝星状细胞、Kupffer细胞和肝内胆管细胞相比,PDPN在肝窦内皮细胞中明显高表达(F=20.56,P<0.001);PDPN蛋白处理小鼠原代肝星状细胞15 min,炎症相关因子TNF-α、CCL3、CXCL1和CXCR1的mRNA表达,与对照组相比均显著升高(P值均<0.05),BAY11-7082(NF-κB信号抑制剂)处理后,上述炎症指标水平均明显下降(P值均<0.05)。  结论  在肝纤维化中主要表达在肝窦内皮细胞的PDPN增加,其通过NF-κB信号调节肝星状细胞活化,促进肝纤维化进展

     

  • 图  1  PDPN在临床肝活检样本中的表达

    注: a,肝活检HE染色和PDPN免疫组化染色;b,PDPN阳性面积统计;c、d,PDPN mRNA与肝纤维化分期的关系。

    Figure  1.  The expression of PDPN mRNA in liver biopsy tissue

    图  2  两组小鼠肝组织病理染色结果

    注: 红色箭头所指代表染色阳性位置。

    Figure  2.  The pathological staining of liver tissue in two groups

    图  3  小鼠肝脏各类型细胞中PDPN mRNA相对表达

    Figure  3.  Relative expression of PDPN mRNA in various types of mouse liver cells

    表  1  RT-PCR引物序列

    Table  1.   The RT-PCR primer sequences

    名称 序列
    18S rRNA 上游:5'-GTAACCCGTTGAACCCCATT-3' 下游:5'-CCATCCAATCGGTAGTAGCG-3'
    Human PDPN 上游:5'-AACCAGCGAAGACCGCTATAA-3' 下游:5'-CGAATGCCTGTTACACTGTTGA-3'
    Mouse PDPN 上游:5'-ACCGTGCCAGTGTTGTTCTG-3' 下游:5'-AGCACCTGTGGTTGTTATTTTGT-3'
    Moues TNFα 上游:5'-ATGAGAGGGAGGCCATTTG-3' 下游:5'-CAGCCTCTTCTCATTCCTGC-3'
    Moues CCL3 上游:5'-TGTACCATGACACTCTGCAAC-3'
    下游:5'-CAACGATGAATTGGCGTGGAA-3'
    Moues CXCR1 上游:5'-ACTGCTGTAAGAGCCTTTGGG-3'
    下游:5'-AGCACCAGAATCACTAGGACA-3'
    Moues CXCL1 上游:5'-ATCCGAAAATCTGTTGTGGC-3'
    下游:5'-CTTTTGCTATCTTCCGCCAG-3'
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    表  2  CCl4模型中PDPN及其mRNA表达分析

    Table  2.   Statistics of PDPN protein and mRNA expression in two groups

    指标 正常组(n=6) 模型组(n=6) t P
    PDPN mRNA 1.00±0.26 9.79±1.73 11.25 0.002
    PDPN阳性面积(%) 0.86±0.15 2.26±0.23 0.95 <0.001
    天狼星红染色面积(%) 0.57±0.13 3.76±0.39 3.04 <0.001
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    表  3  小鼠原代HSC中炎症指标水平

    Table  3.   Expression of inflammatory in mouse primary HSC

    组别 TNF-α mRNA CCL3 mRNA CXCL1 mRNA CXCR1 mRNA
    PBS+Veh组 1.00±0.09 1.00±0.04 1.00±0.02 1.00±0.05
    PDPN+Veh组 1.42±0.061) 1.52±0.091) 2.03±0.111) 1.89±0.031)
    PBS+BAY11-7082组 0.97±0.13 0.94±0.12 1.03±0.15 0.82±0.09
    PDPN+BAY11-7082组 0.86±0.052) 0.90±0.082) 0.99±0.022) 1.04±0.212)
    F 24.46 31.74 85.93 49.96
    P 0.005 0.005 0.003 0.015
    注:BAY11-7082,NF-κB信号抑制剂。与PBS+Veh组比较,1)P<0.05;与PDPN+Veh组比较,2)P<0.05。
    下载: 导出CSV
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出版历程
  • 收稿日期:  2023-05-29
  • 录用日期:  2023-07-17
  • 出版日期:  2024-03-20
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