中文English
ISSN 1001-5256 (Print)
ISSN 2097-3497 (Online)
CN 22-1108/R

留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

HBeAg真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

杨军 刘妮 卫阳 靳耀锋 王军宁 康安静 苏宝山 李宗芳

引用本文:
Citation:

HBeAg真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

基金项目: 

陕西省科技统筹创新工程计划项目(2011KTCL03-14); 教育部新教师基金(编号:2007-0698106); 教育部新世纪优秀人才计划(编号:NCET-10-0647); 

详细信息
  • 中图分类号: R512.62

Construction of a pcDNA-HBeAg expression vector to express HBeAg in CHO cells

Research funding: 

 

  • 摘要:

    目的克隆HBeAg基因,构建重组HBeAg真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中进行表达。方法采用PCR法从HBeAg阳性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增HBeAg基因,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建重组pcDNA-HBeAg真核表达载体,经PCR、双酶切、测序鉴定后,将其转染入CHO细胞,G418筛选,用PCR、免疫斑点、Western Blot、免疫细胞化学方法检测HBeAg在CHO细胞中的表达。结果成功克隆到HBeAg基因,并构建了重组pcDNA-HBeAg真核表达载体;基因测序证实克隆的HBeAg基因中共有12个位点发生单碱基置换突变(C1819G,A2007T,C2046T,C2061G,G2106A,C2109A,C2146T,T2172C,C2203T,A2235G,G2253A,C2298T),1个位点发生缺失突变(2346 del T);成熟HBeAg蛋白中149位缬氨酸(valine,V)突变为苯丙氨酸(phenylalanine,F)(V149F),在HBeAg蛋白羧基端融合有一段长11个氨基酸的多肽(RLESRGPVZTR)。P...

     

  • [1]Lau G, Marcellin P, Peters M.Chronic hepatitis B:a global healthproblem requiring coherent worldwide treatment strategies[J].Hep-atol Int, 2007, 1 (2) :316-325.
    [2]陈大明, 肖宏.全球乙型肝炎疫苗研发分析[J].第二军医大学学报, 2006, 27 (7) :774-777.
    [3]Block TM, Guo H, Guo JT.Molecular virology of hepatitis B virus forclinicians[J].Clin Liver Dis, 2007, 11 (4) :685-706
    [4]Lang T, Lo C, Skinner N, et al.The hepatitis B e antigen (HBeAg) targets and suppresses activation of the toll-like recep-tor signaling pathway[J].J Hepatol, 2011, 55 (4) :762-769.
    [5]Purvina M, Hoste A, Rossignol JM, et al.Human hepatitis B virale antigen and its precursor P20 inhibit T lymphocyte proliferation[J].Biochem Biophys Res Commun, 2012, 417 (4) :1310-1315.
    [6]Chen MT, Billaud JN, Sllberg M, et al.A function of the hep-atitis B virus precore protein is to regulate the immune re-sponse to the core antigen[J].Proc Natl Acad Sci USA, 2004, 101 (41) :14913-14918.
    [7]Chen M, Sllberg M, Hughes J, et al.Immune tolerancesplit between hepatitis B virus precore and core proteins[J].J Virol, 2005, 79 (5) :3016-3027.
    [8]杨志勇, 杨茜, 肖贵宝, 等.HBeAg与乙型肝炎相关性肝细胞癌关系的临床观察[J].临床肝胆病杂志, 2012, 28 (4) :270-272.
    [9]Fattovich G, Bortolotti F, Donato F.Natural history of chronichepatitis B:special emphasis on disease progression andprognostic factors[J].J Hepatol, 2008, 48 (2) :335-352.
    [10]Liaw YF.HBeAg seroconversion as an important end point inthe treatment of chronic hepatitis B[J].Hepatol Int, 2009, 3 (3) :425-433.
    [11]Lau GK.Current treatments for patients with HBeAg-positivechronic hepatitis B virus infection:a comparison focusing onHBeAg seroconversion[J].Liver Int, 2010, 30 (4) :512-520.
    [12]周倩, 核小维, 罗志刚, 等.重组乙型肝炎病毒e抗原的研究进展[J].中国生物工程杂志, 2008, 28 (6) :108-112.
    [13]Roseman AM, Berriman JA, Wynne SA, et al.A structuralmodel for maturation of the hepatitis B virus core[J].ProcNatl Acad Sci USA, 2005, 102 (44) :15821-15826.
    [14]Walsh R, Nuttall S, Revill P, et al.Targeting the hepatitis Bvirus precore antigen with a novel IgNAR single variable do-main intrabody[J].Virology, 2011, 411 (1) :132-141.
  • 加载中
计量
  • 文章访问数:  2829
  • HTML全文浏览量:  13
  • PDF下载量:  652
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 出版日期:  2012-11-20
  • 分享
  • 用微信扫码二维码

    分享至好友和朋友圈

目录

    /

    返回文章
    返回