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摘要: 研究 Ａ８３点突变的生物学意义。采用分子生物学方法，设计引入 Ｋｐｎ Ｉ和 Ｈｉｎｄ ＩＩＩ酶切位点的引物扩增乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型的ＰｃＰ１０标准株中的Ｐｒｅ—Ｃ／Ｃ片段（１８１４—２４５２），经Ｋｐｎ Ｉ和Ｈｉｎｄ ＩＩＩ双酶切后，在Ｔ４ＤＮＡ连接酶的作用下连于ＥＢ病毒真核表达载体，利用定点突变技术对连接载体进行１８９６点的定点诱变。经错配ＰＣＲ—ＲＦＬＰ和测序分析，确定突变的克隆。提取突变前后的质粒转染 ＨｅｐＧ２细胞。突变后在 Ｐｒｅ－Ｃ／Ｃ第２８位氨基酸形成终止密码，使ＨＢｅＡｇ合成终止，转染ＨｅｐＧ２细胞后未能检测到ＨＢｅＡｇ，而未突变的重组质粒则ＨＢｅＡｇ表达为强阳性。ＨＢＶ Ａ８３点突变真核表达载体的构建为体外研究该点突变对ＨＢｅＡｇ表达的影响以及ＨＢｅＡｇ阴性的乙型肝炎病毒感染的致病机理奠定基础。
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