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基于Keap1/Nrf2信号通路探讨丹葛解酲汤对酒精性肝病大鼠模型的作用机制

王铭 徐建虎 马丽

引用本文:
Citation:

基于Keap1/Nrf2信号通路探讨丹葛解酲汤对酒精性肝病大鼠模型的作用机制

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2023.05.018
基金项目: 

宁夏自然科学基金 (2021AAC03146)

宁夏医科大学校级特殊人才启动项目 (XT2020027)

伦理学声明:本研究方案于2022年4月7日经由宁夏医科大学实验动物中心实验动物伦理委员会审批,批号:IACUC-NYLAC-2021-119,符合实验室动物管理与使用准则。
利益冲突声明:本文不存在任何利益冲突。
作者贡献声明:王铭负责实验操作,整理数据,撰写文章;徐建虎负责指导实验和写作,分析数据;马丽负责实验设计,数据分析,拟定写作思路,修改文章及定稿。
详细信息
    通信作者:

    马丽,mali3549@163.com (ORCID: 0000-0002-6646-3438)

Mechanism of action of Dange Jiecheng decoction in a rat model of alcoholic liver disease based on the Kelch-like ECH-associated protein 1/nuclear factor erythroid 2-related factor 2 signaling pathway

Research funding: 

Natural Science Foundation of Ningxia (2021AAC03146);

University Level Special Talents Start-up Project of Ningxia Medical University (XT2020027)

More Information
  • 摘要:   目的  观察丹葛解酲汤对酒精性肝病(ALD)大鼠模型的治疗作用,探讨丹葛解酲汤抗氧化应激的作用机制。  方法  将96只SD大鼠随机分为空白组(n=13)和ALD组(n=83),ALD组采用白酒灌胃法建立ALD模型。随后将存活ALD组大鼠随机分为模型组、丹葛解酲汤高剂量组(24 g/kg)、丹葛解酲汤低剂量组(6 g/kg)及益肝灵片组(21 mg/kg),每组各17只,空白组和模型组给予生理盐水灌胃,其余组分别灌胃给予相应的药物,共干预4周。采用HE染色法观察大鼠肝组织的病理变化;Western Blot法检测肝脏组织Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)的蛋白含量;实时荧光定量PCR检测肝组织Keap1、HO-1 mRNA表达水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。  结果  与空白组相比,模型组肝细胞排列紊乱,出现肝细胞坏死,有大量炎性细胞浸润,并伴有大量的脂滴空泡;Keap1蛋白、Keap1 mRNA表达水平均明显上升(P值均<0.05),Nrf2蛋白、HO-1蛋白、HO-1 mRNA表达水平均明显下降(P值均<0.05)。与模型组相比,丹葛解酲汤高剂量组、丹葛解酲汤低剂量组及益肝灵片组肝细胞排列变整齐,坏死及炎性细胞减少,偶见或无脂滴空泡;Keap1蛋白、Keap1 mRNA表达水平显著降低(P值均<0.05),Nrf2蛋白、HO-1蛋白、HO-1 mRNA表达水平显著上升(P值均<0.05)。  结论  丹葛解酲汤可能通过调节Keap1/Nrf2信号通路,促使Nrf2入核,上调HO-1的表达,减轻氧化应激反应,进而对ALD大鼠发挥保护作用。

     

  • 图  1  各组大鼠肝脏组织病理学变化(HE染色,×200)

    注:a,空白组;b,模型组;c,益肝灵片组;d,中药低剂量组;e,中药高剂量组。

    Figure  1.  Pathological changes in liver tissue of rats in each group (HE, ×200)

    图  2  各组大鼠肝组织Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达量

    注:a,空白组;b,模型组;c,益肝灵片组;d,中药低剂量组;e,中药高剂量组。

    Figure  2.  The protein expression of Keap1, Nrf2 and HO-1 in liver tissue of rats in each group was detected

    表  1  引物序列

    Table  1.   Primer sequence

    基因 上游引物(5′-3′) 下游引物(5′-3′) 产物长度(bp)
    Keap1 CCTCCTCCAGCCCAGTCTTT GCCGTGTAGGCGAACTCAAT 127
    HO-1 CGCATGAACACTCTGGAGATG TGTGAGGGACTCTGGTCTTTGT 143
    β-actin CGTAAAGACCTCTATGCCAACA TAGGAGCCAGGGCAGTAATC 154
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    表  2  各组大鼠Keap1、Nrf2、HO-1蛋白表达量比较

    Table  2.   Comparison of Keap1、Nrf2、HO-1 protein expression in each group

    组别 动物数(只) Keap1 Nrf2 HO-1
    空白组 3 0.38±0.03 0.88±0.05 1.84±0.10
    模型组 3 1.19±0.041) 0.30±0.031) 0.56±0.111)
    益肝灵片组 3 0.44±0.042) 0.10±0.092) 1.80±0.072)
    中药低剂量组 3 0.72±0.092) 0.59±0.032) 1.14±0.092)
    中药高剂量组 3 0.45±0.042) 0.92±0.062) 1.46±0.092)
    F 118.374 64.316 96.754
    P <0.01 <0.01 <0.01
    注:与空白组比较,1)P<0.05;与模型组比较,2)P<0.05。
    下载: 导出CSV

    表  3  各组大鼠Keap1、HO-1 mRNA表达水平比较

    Table  3.   Comparison of Keap1 and HO-1 mRNA expression levels in rats of each group

    组别 动物数(只) Keap1 mRNA HO-1 mRNA
    空白组 3 1.01±0.12 1.09±0.09
    模型组 3 6.70±1.191) 0.27±0.061)
    益肝灵片组 3 1.83±0.092) 0.73±0.092)
    中药低剂量组 3 4.37±1.292) 0.48±0.062)
    中药高剂量组 3 2.20±0.162) 0.61±0.112)
    F 25.493 39.035
    P <0.01 <0.01
    注:与空白组比较,1)P<0.05;与模型组比较,2)P<0.05。
    下载: 导出CSV
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出版历程
  • 收稿日期:  2022-09-25
  • 录用日期:  2022-11-25
  • 出版日期:  2023-05-20
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