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HBV感染者外周血自然杀伤样B淋巴细胞、自然杀伤细胞、B淋巴细胞亚群的变化及临床意义

杨晓飞 申焕君 黄高铂 连建奇 张野

引用本文:
Citation:

HBV感染者外周血自然杀伤样B淋巴细胞、自然杀伤细胞、B淋巴细胞亚群的变化及临床意义

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.07.008
基金项目: 

国家自然科学基金 (31370856)

国家自然科学基金 (81671555)

伦理学声明:本研究方案于2015年5月21日经由空军军医大学第二附属医院(第四军医大学唐都医院)伦理委员会批准,批号:TDLL-201505-013,所有入组受试者均签署知情同意书。
利益冲突声明:本研究不存在研究者、伦理委员会成员、受试者监护人以及与公开研究成果有关的利益冲突。
作者贡献声明:杨晓飞、申焕君、黄高铂负责实验操作和论文撰写;杨晓飞、连建奇、张野负责数据分析;连建奇、张野负责入组患者、课题设计、指导论文撰写并最后定稿。
详细信息
    通信作者:

    张野,zhangyefmmu@hotmail.com

Changes and clinical significance of natural killer-like B cells, natural killer cells, and B cells in peripheral blood of patients with hepatitis B virus infection

Research funding: 

National Natural Science Foundation of China (31370856);

National Natural Science Foundation of China (81671555)

More Information
  • 摘要:   目的  观察HBV感染者自然杀伤样B淋巴细胞(NKB淋巴细胞)、NK细胞和B淋巴细胞亚群的变化,分析其与临床指标的相关性。  方法  选取2017年1月—2018年12月在唐都医院就诊的急性乙型肝炎(AHB)患者15例、慢性乙型肝炎(CHB)患者30例、无症状HBV携带者(ASC)29例和对照者12例。采集外周血,分离血浆和外周血单个核细胞。酶联免疫吸附试验检测血浆IL-18和IFNγ水平。酶联斑点吸附试验检测HBV特异性CD8+T淋巴细胞分泌IFNγ水平。流式细胞术检测CD3-CD19+CD56+CD16+NKB淋巴细胞、不同NK细胞亚群(CD3-CD19-CD56highCD16-NK细胞、CD3-CD19-CD56+CD16+NK细胞、CD3-CD19-CD56-CD16+NK细胞)、CD3-CD19+B淋巴细胞比例,分析与病毒复制、肝脏炎症指标的相关性。符合正态分布的计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。不符合正态分布的计量资料多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验。相关性分析采用Pearson相关性检验。  结果  CD3-CD19+CD16+CD56+NKB淋巴细胞占淋巴细胞的比例在AHB患者、CHB患者、ASC和对照者之间的差异有统计学意义(F=16.42,P<0.000 1),CHB患者NKB淋巴细胞比例[(0.79±0.13)%]显著低于AHB患者[(0.94±0.15)%]、ASC[(1.02±0.12)%]和对照者[(1.11±0.27)%](P值均<0.001)。血浆IL-18水平在AHB患者、CHB患者、ASC和对照者之间的差异有统计学意义(F=5.733,P=0.001),CHB患者IL-18水平[(259.30±70.09)pg/mL]显著低于AHB患者[(336.00±103.00)pg/mL]和对照者[(319.30±64.80)pg/mL](P值均<0.05),ASC IL-18水平[(258.60±59.82)pg/mL]亦显著低于AHB患者和对照者(P值均<0.01),但血浆IL-18在CHB患者和ASC之间的差异无统计学意义(P=0.965)。CD3-CD19-CD56highCD16-NK细胞、CD3-CD19-CD56+CD16+NK细胞、CD3-CD19-CD56-CD16+NK细胞以及B淋巴细胞比例在4组之间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。CHB患者血浆IFNγ水平显著低于AHB患者、ASC者和对照者(P值均<0.01)。NKB淋巴细胞比例和IL-18与HBV DNA定量、ALT水平均无显著相关性(P值均>0.05)。CHB患者中NKB淋巴细胞占淋巴细胞的比例与血浆IL-18水平呈正相关(r=0.432,P=0.017),与病毒特异性CD8+T淋巴细胞分泌IFNγ水平呈正相关(r=0.493,P=0.006)。  结论  NKB淋巴细胞和IL-18可能参与HBV感染慢性化,与慢性HBV感染自然史相关。

     

  • 图  1  外周血NKB淋巴细胞、NK细胞、B淋巴细胞的流式分析策略

    Figure  1.  Flow cytometry analysis strategy for peripheral NKB cells, NK cells, and B cells

    图  2  HBV感染者和对照者外周血NKB淋巴细胞、NK细胞、B淋巴细胞比例和IL-18、IFNγ水平比较

    注:a,CD3-CD19+CD16+CD56+NKB淋巴细胞;b,CD3-CD19-CD56highCD16- NK细胞;c,CD3-CD19-CD56+CD16+NK细胞;d,CD3-CD19-CD56-CD16+ NK细胞;e,B淋巴细胞;f,IL-18;g,IFNγ。

    Figure  2.  Comparison of peripheral NKB cells, NK cells, and B cells percentage and IL-18, IFNγlevel among HBV infected patients and controls

    图  3  CHB患者中NKB淋巴细胞与其他指标相关性分析

    注:a,NKB淋巴细胞比例与血浆IL-18水平相关性分析;b,NKB淋巴细胞比例与血浆IFNγ水平相关性分析;c,NKB淋巴细胞比例与病毒特异性CD8+T淋巴细胞分泌IFNγ水平相关性分析。

    Figure  3.  Correlation analysis of NKB cells and other index in CHB patients

    表  1  入组受试者一般资料比较

    Table  1.   Comparison of clinical data of enrolled subjects

    项目 AHB患者
    (n=15)
    CHB患者
    (n=30)
    ASC
    (n=29)
    对照者
    (n=12)
    统计值 P
    男/女(例) 13/2 23/7 22/7 10/2 χ2=0.429 0.286
    年龄(岁) 33.50±8.54 32.20±8.86 26.70±8.43 31.20±3.74 F=3.311 0.024
    ALT(U/L) 384(250~822) 114(81~172) 32(24~39) 16(9~31)1) H=22.160 <0.000 1
    HBV DNA (log10IU/mL) 4.24±1.44 7.85±1.38 7.60±0.79 F=51.070 <0.000 1
    HBeAg阳性 11 21 29
    抗-HBe阳性 4 9 0
    注:1)此结果为10例对照者的结果,2例对照者未行ALT检测。
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出版历程
  • 收稿日期:  2021-11-24
  • 录用日期:  2022-02-09
  • 出版日期:  2022-07-20
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