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6-姜酮酚抑制肝内胆管癌细胞的增殖、迁移、侵袭作用及其机制探讨

陈泽昊 朱文杰 申兵兵 江建新

引用本文:
Citation:

6-姜酮酚抑制肝内胆管癌细胞的增殖、迁移、侵袭作用及其机制探讨

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.04.022
基金项目: 

国家自然科学基金 (81871965)

利益冲突声明:本研究不存在研究者、伦理委员会成员、受试者监护人以及与公开研究成果有关的利益冲突。
作者贡献声明:陈泽昊对于研究的思路或设计有关键贡献;陈泽昊、朱文杰参与了研究数据的获取及分析解释;陈泽昊、申兵兵参与起草或修改文章关键内容;江建新参与文章的审阅及批改。
详细信息
    通信作者:

    江建新, rm002979@whu.edu.cn

Inhibitory effect of 6-paradol on the proliferation, migration, and invasion of intrahepatic cholangiocarcinoma cells and its mechanism

Research funding: 

National Natural Science Foundation of China (81871965)

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  • 摘要:   目的  研究6-姜酮酚(6-Paradol)对人肝内胆管癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用及机制。  方法  人肝内胆管癌细胞系HCCC 9810和HUCCT1以不同浓度的6-Paradol及等体积的DMSO(对照组)处理后,采用CCK-8、平板克隆、划痕愈合及Transwell实验检测其增殖、迁移及侵袭能力。应用生物信息学软件Swiss Target Prediction预测6-Paradol作用的蛋白靶点,采用Western blot检测胆管癌细胞中STAT3、p-STAT3、SRC、p-mTOR、p21、Bcl-2以及p53的蛋白表达水平;采用药物亲和反应实验(DARTS)探究6-Paradol与STAT3的相互作用;胆管癌HCCC 9810和HUCCT1细胞分别转染STAT3过表达质粒或sh-p21质粒后,qRT-PCR检测各组细胞中STAT3和p21的mRNA水平,Western blot检测STAT3和p21的蛋白表达量;CCK-8、划痕愈合及Transwell实验检测各组细胞增殖及迁移侵袭能力。计量资料两组间比较采用t检验;多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。  结果  与对照组相比,6-Paradol处理组中各组细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显减弱(P值均<0.05)。6-Paradol处理组细胞中STAT3、p-STAT3的表达水平较对照组显著下调(P值均<0.05),p21的表达水平显著增加(P值均<0.05),而Bcl-2、SRC和p-mTOR的表达水平无明显变化(P值均>0.05)。6-Paradol处理组中STAT3被蛋白酶水解的比例分别减少了48.66%、45.33%(t值分别为16.64、8.76, P值均<0.05);分别转染STAT3过表达质粒及沉默p21质粒后,胆管癌细胞中STAT3 mRNA水平均显著增加(tHCCC 9810=2.82,tHUCCT1=5.60,P值均<0.05),p21 mRNA水平均显著降低(tHCCC 9810=6.84,tHUCCT1=3.91, P值均<0.05)。CCK-8结果提示6-Paradol作用48 h及72 h后HCCC 9810细胞和HUCCT1细胞中STAT3过表达组的增殖率较单独给药组显著提高,p21沉默组增殖率较单独给药组也明显提高(P值均<0.05)。划痕愈合实验结果提示在过表达STAT3或沉默p21的HCCC 9810及HUCCT1细胞中,与单独给药组相比划痕愈合率明显提升(P值均<0.05)。Transwell实验结果表明,在过表达STAT3或者沉默p21表达的HCCC 9810及HUCCT1细胞中,与单独给药组相比迁移率均明显提升(P值均<0.05);在过表达STAT3或沉默p21表达的HCCC 9810及HUCCT1细胞中,与单独给药组相比侵袭率均显著提升(P值均<0.05)。  结论  6-Paradol通过靶向作用于STAT3-p21通路抑制胆管癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

     

  • 图  1  CCK-8及克隆形成实验检测不同浓度的6-Paradol对人HCCC 9810和HUCCT1细胞增殖的抑制作用

    注:a、b,CCK-8实验;c,平板克隆实验。*P<0.05, * *P<0.01, * * *P<0.001。

    Figure  1.  The inhibitory effect of different concentrations of 6-Paradol on the proliferation of HCCC 9810 and HUCCT1 cells detected by CCK-8 and colony formation assays

    图  2  不同浓度6-Paradol对人HCCC 9810和HUCCT1细胞迁移、侵袭能力的影响

    注:a、c,划痕愈合实验;b、d,Transwell小室实验(×100)。

    Figure  2.  Effect of different concentrations of 6-Paradol on the migration and invasion ability of HCCC 9810 and HUCCT1 cells

    图  3  6-Paradol的结构及其作用的蛋白靶点预测及互作网络构建

    注:a,6-Paradol的结构;b,6-Paradol作用的蛋白靶点预测及互作网络构建。

    Figure  3.  6-Paradol's structure and protein target prediction and interaction network construction

    图  4  Western blot检测不同浓度的6-Paradol对人HCCC 9810和HUCCT1细胞中相关蛋白表达的影响

    注:a, 6-Paradol处理后HCCC 9810细胞中STAT3、p-mTOR蛋白表达量;b, 6-Paradol处理后HUCCT1细胞中STAT3、p-mTOR蛋白表达量;c, 6-Paradol处理后HCCC 9810细胞中p-STAT3、SRC蛋白表达量;d, 6-Paradol处理后HUCCT1细胞中p-STAT3、SRC蛋白表达量;e, 6-Paradol处理后HCCC 9810细胞中p21、Bcl-2、p53蛋白表达量;f, 6-Paradol处理后HUCCT1细胞中p21、Bcl-2、p53蛋白表达量。

    Figure  4.  Western blot was used to detect the effect of different concentrations of 6-Paradol on the expression of related proteins in HCCC 9810 and HUCCT1 cells

    图  5  DARTS探究6-Paradol与STAT3的相互作用

    注:a、b、c, DARTS探究HCCC 9810细胞中6-Paradol与STAT3的相互作用;d、e、f,DARTS探究HUCCT1细胞中6-Paradol与STAT3的相互作用。* * *P<0.001。

    Figure  5.  DARTS was used to explore the interaction between 6-Paradol and STAT3

    图  6  qRT-PCR验证STAT3过表达质粒及sh-p21质粒的转染效率

    注:*P<0.05, * *P<0.01。

    Figure  6.  qRT-PCR was used to verify the transfection efficiency of STAT3 overexpression plasmid and sh-p21 plasmid

    图  7  6-Paradol对HCCC 9810和HUCCT1细胞增殖及迁移、侵袭的抑制作用

    注:a、b,CCK-8实验检验细胞增殖能力;c、d,划痕实验;e、f,Transwell小室实验(×100);* * *P<0.001。

    Figure  7.  Inhibitory effect of 6-Paradol on the proliferation, migration and invasion of HCCC 9810 and HUCCT1 cells

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  • 收稿日期:  2021-08-24
  • 出版日期:  2022-04-20
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