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Construction of the RNA interference vector of tissue inhibitor of matrix metalloproteinase -1 gene and its inhibitory effects
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摘要:
目的构建含有基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）基因特异性RNA干扰序列的慢病毒vshRNA载体,筛选有效靶点序列。方法通过在线软件设计TIMP-1基因的RNA干扰（RNAi）序列,按siRNA设计的优化原则筛选靶序列,构建含有TIMP-1基因特异性慢病毒vshRNA载体。将重组pEGFP-N1-3FLAG-TIMP-1质粒和慢病毒质粒pGCSIL-GFP-shRNA共转染293T细胞,转染48 h后收集细胞,抽提总蛋白进行Western Blot检测,筛选抑制效应较好的质粒。结果依次通过在线软件设计序列、优化筛选、BLAST比对等方法,选择4条作为靶序列,又经Western Blot检测筛选出抑制效应较好的1条序列,其在TIMP-1基因的173～192 nt处。结论成功构建了具有抑制效应的TIMP-1基因特异性RNA干扰序列的慢病毒vshRNA载体,筛选出抑制TIMP-1表达的序列,为抗肝纤维化研究奠定了基础。
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关键词:
- 金属蛋白酶组织抑制剂 /
- RNA干扰 /
- 肝硬化
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