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调控型表达丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶转基因小鼠的建立

孙梦宁 兰海云 马玉 赵亚 吕欣 杨敬 雷迎峰 姚敏 康健 招明高 汪爱勤 尹文

引用本文:
Citation:

调控型表达丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶转基因小鼠的建立

基金项目: 

国家“863”计划专题(2007AA02Z154); 国家自然科学基金(30872218); 陕西省科技攻关计划(2010K15-03-04); 

详细信息
  • 中图分类号: R-332

Generation of conditionally controlled transgenic mice expressing hepatitis C virus NS3/4A protease

Research funding: 

 

  • 摘要:

    目的建立调控因素存在下表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶的转基因小鼠。方法采用分子克隆技术构建可受Tet-On调控系统和Cre-LoxP基因敲除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的真核表达质粒PBI-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A。该重组质粒线性化后,经显微注射制备转基因小鼠。首建鼠及经PCR检测阳性的子代鼠与C57BL/6小鼠交配传代。选择部分F2鼠与已经稳定建系的转基因小鼠Lap杂交,利用在体生物发光成像系统(BLI)检测肝脏稳定表达荧光素酶(Luc)报告基因的经盐酸强力霉素(Dox)诱导的双转基因子代鼠,并选择性针对稳定表达系传代扩群。结果酶切鉴定和测序分析显示重组载体构建成功。经PCR检测得到6只转基因首建鼠,其中3只可繁殖传代并持续检测到阳性子代鼠。BLI结果显示,由其中1只首建鼠传代而来的不同F2鼠与Lap鼠杂交得到的部分双转基因鼠肝脏部位发光信号强烈,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达。结论建立了转基因小鼠NS3/4A,并筛选到调控因素存在时转入外源基因特异稳定表达的转基因小鼠,为进一步建立严格调控型表达...

     

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  • 出版日期:  2011-01-20
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