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ISSN 1001-5256
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可利霉素对胰腺癌细胞生物学功能的影响

白丽娜 刘颖 唐春晓 朴红心 林贞花 杨万山 金爱花

引用本文:
Citation:

可利霉素对胰腺癌细胞生物学功能的影响

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.12.020
基金项目: 

吉林省教育厅科学技术研究项目 JJKH20220554KJ;

吉林省卫生健康科技能力提升项目 2021JC063

利益冲突声明:本研究不存在研究者及与公开研究成果有关的利益冲突。
作者贡献声明:白丽娜负责实验设计、实施、论文撰写及数据分析;刘颖、唐春晓负责实验设计、实施及论文修改;杨万山负责实验设计与论文修改;金爱花、朴红心、林贞花负责拟定写作思路,指导撰写文章并最后定稿。
详细信息
    通信作者:

    金爱花,drjinah@163.com

Mechanism of carrimycin in regulating the biological function of pancreatic cancer cells

Research funding: 

Science and Technology Research Project of Jilin Province Department of Education JJKH20220554KJ;

Heatth Science and Technology Capacity Improvement Project of Jilin Province 2021JC063

More Information
    Corresponding author: JIN Aihua, drjinah@163.com (ORCID: 0000-0002-3405-8097)
  • 摘要:   目的  探讨可利霉素(Carrimycin)对胰腺癌细胞生物学功能的影响。  方法  胰腺癌细胞MIA PaCa-2、BxPC-3、Panc-1和PATU 8988以0(对照组)、2、4、8和16 μmol/L的可利霉素处理24、48和72 h后,MTT法检测细胞活性;EdU细胞增殖实验检测可利霉素对胰腺癌细胞DNA复制能力的影响;集落形成实验检测可利霉素对胰腺癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术分析可利霉素对胰腺癌细胞周期的影响;划痕愈合实验分析可利霉素对胰腺癌细胞迁移能力的影响;免疫蛋白印迹实验检测上皮细胞-间充质转化和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)等标志物的表达水平;免疫荧光实验检测上皮间质转化相关标志物的表达水平。多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。  结果  与对照组相比,可利霉素可显著抑制MIA PaCa-2、BxPC-3、Panc-1和PATU 8988细胞的增殖活性,且呈药物浓度与时间依赖性(P值均<0.01);4、8、16 μmol/L可利霉素可显著降低PC细胞MIA PaCa-2(t值分别为2.378、4.984、18.970,P值均<0.05)及BxPC-3(t值分别4.879、6.089、9.521,P值均<0.01)的DNA复制能力;4、8、16 μmol/L可利霉素处理PC细胞14 d后,MIA PaCa-2(t值分别为5.889、11.240、15.840,P值均<0.001)和BxPC-3(t值分别为6.717、15.800、18.850,P值均<0.001)细胞的集落形成能力随着药物浓度的增加而明显减少。4、8、16 μmol/L可利霉素处理后MIA PaCa-2细胞G1期比例(t值分别为9.071、12.280、19.360,P值均<0.000 1)及BxPC-3细胞G1期比例(t值分别为3.061、4.962、8.868,P值均<0.05)均增加,MIA PaCa-2细胞S期比例(t值分别为2.316、4.165、5.562,P值均<0.05)及BxPC-3细胞S期比例(t值分别为2.424、3.264、5.744,P值均<0.05)均降低。Western Blot实验进一步证实,与对照组比较,周期相关蛋白P21在MIA PaCa-2(t值分别为5.437、6.453、8.799,P值均<0.001)和BxPC-3细胞(t值分别为25.130、44.750、52.960,P值均<0.000 1)中的表达水平随可利霉素用药浓度增加而逐渐上调。划痕愈合实验结果显示,0和4、8、16 μmol/L可利霉素处理12、24和48 h PC细胞MIA PaCa-2(P值均<0.05)及BxPC-3(P值均<0.05)的横向迁移能力明显减弱。Western blot实验结果显示,与对照组比较,4、8、16 μmol/L可利霉素处理后MIA PaCa-2(t值分别为2.388、4.899、5.819,P值均<0.05)及BxPC-3细胞(t值分别为2.533、5.836、6.774,P值均<0.05)中上皮标志物E-cadherin的表达明显上调,4、8、16 μmol/L可利霉素处理后MIA PaCa-2(t值分别为12.440、14.830、16.800,P值均<0.000 1)及BxPC-3细胞(t值分别为5.039、5.893、7.725,P值均<0.01)中间质标志物Snail的表达水平显著下调,4、8、16 μmol/L可利霉素处理后MIA PaCa-2(t值分别为3.105、7.752、11.200,P值均<0.05) 及BxPC-3细胞(t值分别为2.555、4.883、9.153,P值均<0.05)中间质标志物Vimentin的表达水平也显著下调。  结论  可利霉素可有效抑制胰腺癌细胞的增殖、迁移及上皮细胞-间充质转化进程,从而发挥其抗肿瘤的生物学活性。

     

  • 图  1  MTT法检测0、2、4、8和16 μmol/L的可利霉素对PC细胞系的细胞增殖活性。

    注:**P<0.01;***P<0.001;****P<0.000 1。

    Figure  1.  Cell viabilityof PC cells treated by Carrimycin for 0, 2, 4, 8 and 16 μmol/L was measured by MTT assay

    图  2  EdU及集落形成实验检测不同浓度的可利霉素对MIA PaCa-2和BxPC-3细胞增殖的抑制作用

    注:a,EdU实验检测0和4、8、16 μmol/L可利霉素对PC细胞MIA PaCa-2和BxPC-3的DNA复制能力的影响;b,集落形成实验检测0和4、8、16 μmol/L可利霉素对PC细胞MIA PaCa-2和BxPC-3克隆形成能力的影响。*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,****P<0.000 1。

    Figure  2.  The inhibitory effects of different concentrations of Carrimycin on the proliferation of MIA PaCa-2 and BxPC-3 cells were detected by EdU and colony formation assay

    图  3  细胞周期和Western Blot实验检测不同浓度的可利霉素对MIA PaCa-2和BxPC-3细胞周期的影响

    注:a,细胞周期实验检测0和4、8、16 μmol/L可利霉素对PC细胞MIA PaCa-2和BxPC-3细胞周期的影响;b,Western blot实验检测0和4、8、16 μmol/L可利霉素处理后PC细胞MIA PaCa-2和BxPC-3中P21蛋白的表达量。*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,****P<0.0001。

    Figure  3.  Cell cycle and Western Blot experiments were performed to examine the effects of different concentrations of Carrimycin on the cell cycle of MIA PaCa-2 and BxPC-3 cells

    图  4  不同浓度的可利霉素对MIA PaCa-2和BxPC-3细胞迁移及EMT进程的影响

    注:a,划痕愈合实验检测0和4、8、16 μmol/L可利霉素对PC细胞MIA PaCa-2和BxPC-3迁移能力的影响;b,0、4、8、16 μmol/L可利霉素处理PC细胞MIA PaCa-2和BxPc-3细胞伤口愈合率;c,Western blot实验检测0和4、8、16 μmol/L可利霉素处理后PC细胞MIA PaCa-2和BxPC-3中EMT相关蛋白E-cadherin、Snail和Vimentin的表达水平;d,免疫荧光实验检测0和4、8、16 μmol/L可利霉素处理后PC细胞MIA PaCa-2和BxPC-3中E-cadherin和Vimentin的表达水平。*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,****P<0.000 1。

    Figure  4.  Effects of different concentrations of Carrimycin on migration and EMT progression of MIA PaCa-2 and BxPC-3 cells

    表  1  不同浓度的可利霉素对MIA PaCa-2细胞和BxPC-3细胞迁移的影响

    Table  1.   Effect of carrimycin at different concentrations on the migration of MIA PaCa-2 cells and BxPC-3 cells migration

    组别 对照组 4 μmol/L 8 μmol/L 16 μmol/L
    MIA PaCa-2细胞
      12 h 15.23±2.84 11.97±1.90 8.58±1.05 2.53±0.64
      24 h 25.08±1.98 21.11±2.23 14.08±2.48 5.36±1.49
      48 h 28.31±1.53 23.63±2.06 17.93±1.12 12.06±1.79
    BxPC-3细胞
      12 h 18.15±2.15 14.54±1.91 7.61±2.01 5.80±1.53
      24 h 38.28±1.74 31.80±3.45 19.50±2.64 15.08±1.14
      48 h 50.75±2.35 39.71±2.64 29.50±2.47 24.89±2.31
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出版历程
  • 收稿日期:  2022-05-26
  • 录用日期:  2022-07-20
  • 出版日期:  2022-12-20
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