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ISSN 1001-5256
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桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其机制

刘旭凌 杨广越 张玮 孙田甜 马文婷 吴柳 薛冬英 刘成 陶乐

刘旭凌,杨广越,张玮,等. 桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其机制[J]. 临床肝胆病杂志, 2021, 37(11): 2563-2568. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.11.016.
引用本文: 刘旭凌,杨广越,张玮,等. 桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其机制[J]. 临床肝胆病杂志, 2021, 37(11): 2563-2568. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.11.016.
LIU XL, YANG GY, ZHANG W, et al. Therapeutic effect of Taohong Siwu decoction on a mouse model of carbon tetrachloride-induced liver fibrosis and its mechanism[J]. J Clin Hepatol, 2021, 37(11): 2563-2568. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.11.016.
Citation: LIU XL, YANG GY, ZHANG W, et al. Therapeutic effect of Taohong Siwu decoction on a mouse model of carbon tetrachloride-induced liver fibrosis and its mechanism[J]. J Clin Hepatol, 2021, 37(11): 2563-2568. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.11.016.

桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其机制

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.11.016
基金项目: 

国家自然科学基金项目 81673788;

国家自然科学基金项目 81873136;

国家自然科学基金项目 81803898;

国家自然科学基金项目 81803232;

国家自然科学基金项目 82004106;

上海市自然基金 20ZR1450300;

上海市卫生健康委员会卫生行业临床研究专项 202040149;

上海市普陀区自主创新项目 ptkwws201817;

上海市普陀区自主创新项目 ptkwws201904

详细信息
    通信作者:

    陶乐,talent901036@163.com

  • 中图分类号: R575.2

Therapeutic effect of Taohong Siwu decoction on a mouse model of carbon tetrachloride-induced liver fibrosis and its mechanism

Research funding: 

National Natural Science Foundation of China 81673788;

National Natural Science Foundation of China 81873136;

National Natural Science Foundation of China 81803898;

National Natural Science Foundation of China 81803232;

National Natural Science Foundation of China 82004106;

Shanghai National Natural Science Foundation 20ZR1450300;

Shanghai Municipal Health Commission 202040149;

Indenpdent Innovation Project of Shanghai Puotuo District Project ptkwws201817;

Indenpdent Innovation Project of Shanghai Puotuo District Project ptkwws201904

  • 摘要:   目的  探讨桃红四物汤对CCl4诱导肝纤维化小鼠模型的干预作用及其作用机制。  方法  24只雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、模型组和桃红四物汤组,每组8只。模型组和桃红四物汤组小鼠腹腔注射10%CCl4,第3周开始给予桃红四物汤灌胃给药4周,检测肝功能(ALT、AST),观测肝组织病理形态学。实时荧光定量PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、透明质酸合成酶-2(HAS-2)、Ⅰ型胶原(Col1)mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测α-SMA、Col1及HAS-2蛋白的表达。分离小鼠原代肝星状细胞(HSC),应用siRNA沉默HAS-2,检测其对HSC激活的影响。计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组内进一步两两比较采用SNK或LSD-t检验。  结果  与正常组相比,模型组血清肝功能指标ALT、AST水平显著升高,桃红四物汤组小鼠血清ALT、AST水平均显著下降(P值均<0.01)。病理学染色显示:模型组炎症细胞浸润明显,增生的胶原纤维形成纤维间隔;桃红四物汤组胶原纤维间隔较疏松及炎症细胞浸润减轻。与模型组相比,桃红四物汤组α-SMA、Col1 mRNA和蛋白的表达水平均显著降低(P值均<0.001)。与正常组比较,模型组肝组织中HAS-2 mRNA表达水平显著升高(t=6.14,P<0.05),桃红四物汤组HAS-2蛋白表达水平(0.29±0.10)较模型组(1.00±0.12)明显减少(t=70.73,P<0.001)。siRNA沉默HAS-2,TGFβ处理后(Si HAS-2+TGFβ组)α-SMA、Col1 mRNA表达水平较NC+TGFβ组显著降低(P<0.01)。  结论  桃红四物汤通过抑制HAS-2对CCl4致小鼠纤维化有显著治疗作用。

     

  • 图  1  肝组织病理结果(×100)

    注:a,HE染色,×100;b,天狼星红染色,×100。

    图  2  各组小鼠肝组织α-SMA、Col1表达比较

    注:a,α-SMA免疫组化结果(×100);b,α-SMA、Col1免疫印迹结果。

    图  3  各组小鼠肝组织HAS-2表达比较

    注:a,HAS-2免疫组化结果(×100);b,HAS-2免疫印迹结果。

    表  1  RT-PCR引物序列

    名称 序列
    18S RNA 上游引物:5′-GTAACCCGTTGAACCCCATT-3′
    下游引物:5′-CCATCCAATCGGTAGTAGCG-3′
    Col1 上游引物:5′-TAGGCCATTGTGTATGCAGC-3′
    下游引物:5′-ACATGTTCAGCTTTGTGGACC-3′
    α-SMA 上游引物:5′-GTTCAGTGGTGCCTCTGTCA-3′
    下游引物:5′-ACTGGGACGACATGGAAAAG-3′
    HAS-1 上游引物:5′-CTATGCTACCAAGTATACCTCG-3′
    下游引物:5′-TCTCGGAAGTAAGATTTGGAC-3′
    HAS-2 上游引物:5′-TGAACAAAACGGTAGCAATCTG-3′
    下游引物:5′-ACTTTAATCCCAGGGTAGGTCAG-3′
    HAS-3 上游引物:5′-GATGTCCAAATCCTCAACAAG-3′
    下游引物:5′-CCCACTAATACATTGCACAC-3′
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    表  2  各组血清转氨酶水平及病理学改变

    指标 正常组(n=8) 模型组(n=8) 桃红四物汤组(n=8) F P
    ALT(U/L) 6.61±1.92 247.33±21.761) 144.84±15.942) 10.75 <0.001
    AST(U/L) 8.41±3.48 173.44±31.231) 108.05±18.452) 5.10 <0.001
    炎性细胞面积(%) 2.76±0.98 12.37±1.091) 6.58±0.722) 12.52 <0.001
    天狼星红面积(%) 1.20±0.35 10.80±2.491) 5.62±4.312) 5.50 <0.001
    注:1)与正常组比较,P<0.01;2)与模型组比较,P<0.01。
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    表  3  各组α-SMA、Col1表达水平比较

    指标 正常组(n=8) 模型组(n=8) 桃红四物汤组(n=8) F P
    免疫印迹
        α-SMA/GADPH 1.00±0.12 10.79±0.471) 4.34±1.042) 169.96 <0.001
        Col1/GADPH 1.00±0.54 7.56±0.961) 3.67±1.202) 36.98 <0.001
    RT-PCR
        α-SMA mRNA 1.00±0.28 5.50±1.741) 3.12±0.702) 33.73 <0.001
        Col1 mRNA 1.00±0.44 4.63±1.541) 2.98±1.292) 18.80 <0.001
    注:1)与正常组比较,P<0.01;2)与模型组比较,P<0.01。
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    表  4  各组HAS-1、HAS-2、HAS-3mRNA表达情况

    指标 正常组 模型组 t P
    HAS-1 1.00±0.19 1.22±0.49 1.46 0.247
    HAS-2 1.00±0.04 2.59±0.17 6.14 0.027
    HAS-3 1.00±0.24 0.97±0.31 0.00 0.962
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    表  5  α-SMA、Col1、HAS-2mRNA在原代HSC中的表达水平

    指标 对照组 TGFβ处理组 t P
    α-SMA mRNA 1.00±0.53 50.59±6.28 -11.165 0.008
    Col1 mRNA 1.00±0.63 30.39±1.49 -27.73 0.001
    HAS-2 mRNA 1.00±0.47 9.72±0.64 -19.36 0.003
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    表  6  基因沉默HAS2检测THSWD对HSC活化的影响

    组别 α-SMA mRNA Col1 mRNA
    NC 1.00±0.14 1.00±0.92
    NC+TGFβ 52.98±4.891) 30.28±0.421)
    NC+TGFβ+THSWD 30.31±0.612) 18.33±0.902)
    Si HAS-2 0.90±0.077 1.53±0.24
    Si HAS-2+TGFβ 25.11±2.512) 19.09±2.352)
    Si HAS-2+TGFβ+THSWD 24.44±1.05 20.68±2.08
    F 146.12 151.59
    P <0.001 <0.001
    注:NC,空白对照;1)与NC比较,P<0.01;2)与NC+TGFβ,比较P<0.01。
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出版历程
  • 收稿日期:  2021-03-09
  • 录用日期:  2021-04-21
  • 出版日期:  2021-11-20
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