中文English
ISSN 1001-5256 (Print)
ISSN 2097-3497 (Online)
CN 22-1108/R

留言板

尊敬的读者、作者、审稿人, 关于本刊的投稿、审稿、编辑和出版的任何问题, 您可以本页添加留言。我们将尽快给您答复。谢谢您的支持!

姓名
邮箱
手机号码
标题
留言内容
验证码

体外HBV感染的人肝癌Huh7细胞系中葡萄糖神经酰胺合成酶活性的变化

甘建 杨睿 雷程程 杨亚婷 闫力婷 田爱平 毛小荣 王莉莉 李俊峰

引用本文:
Citation:

体外HBV感染的人肝癌Huh7细胞系中葡萄糖神经酰胺合成酶活性的变化

DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2021.04.021
基金项目: 

甘肃省自然科学基金 (20JR5RA364)

兰州大学第一医院院内基金 (ldyyyn2017-17)

甘肃省高等学校科学研究项目 (2018B-009)

甘肃省卫生行业科研计划项目 (GSWSKY2018-24)

利益冲突声明:本研究不存在研究者、伦理委员会成员、受试者监护人以及与公开研究成果有关的利益冲突。
作者贡献声明:甘建、杨睿负责课题设计,资料分析,撰写论文;雷程程、杨亚婷、闫力婷、王莉莉参与临床资料收集,数据分析;田爱平、毛小荣、李俊峰负责拟定写作思路,指导撰写文章,修改论文并最后定稿。
详细信息
    作者简介:

    甘建(1992—),男,在读博士,主要从事感染性疾病研究

    杨睿(1997—),男,主要从事内科疾病诊治

    通信作者:

    李俊峰,junfenglee@126.com

    二者对本文贡献相同,同为第一作者

  • 中图分类号: R512.62

Change in the activity of glucosylceramide synthase in human hepatoma cell line with hepatitis B virus infection in vitro

  • 摘要:   目的  探索糖鞘脂代谢合成关键酶葡萄糖神经酰胺(GCS)在体外HBV感染Huh7细胞中的活性变化。  方法  收集2019年6月—8月就诊于兰州大学第一医院感染科的9例初治急性乙型肝炎患者的血液标本,另选7例健康体检者的血液标本作为对照。利用HBV感染者血清中高拷贝HBV颗粒(>9.9×107 IU/ml)接种Huh7细胞系(感染组),对照组用健康体检者的血清共培养。检测HBV感染细胞胞浆中HBsAg和HBV DNA的表达量以及GCS的活性变化与病毒的相关性。计量资料多组间数据比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。相关性分析采用Pearson检验。  结果  感染组细胞较同期对照组细胞数量明显减少、细胞体积肿胀和细胞膜破碎。感染组:感染4 h、8 h、2 d和5 d后胞浆中HBsAg表达量均高于感染前(P<0.05);与感染4 h(16.67±11.55) IU/ml相比,感染8 h(112.01±25.94) IU/ml、2 d(328.01±103.50) IU/ml和5 d(101.60±49.84) IU/ml后胞浆中HBV DNA表达量呈明显升高趋势(P值均<0.001),并在感染2 d时HBV DNA表达量达到最高。在HBV感染期间,随着病毒复制的增加,GCS活性呈现出增高的特点,从感染4 h(126.21±9.59) IU/ml开始逐渐升高,并于感染2 d时(226.53±36.27) IU/ml达到高峰,感染2 d时与对照组(136.50±15.44) IU/ml比较,差异有统计学意义(t=3.956,P=0.016 7)。GCS活性与HBV DNA水平存在显著正相关(r=0.576 8, P=0.047 1)。  结论  HBV感染者血清中高拷贝HBV颗粒能成功感染Huh7细胞系,并在一定程度上模拟了HBV感染的体外特点。GCS活性可能与HBV的感染有关,表明糖鞘脂合成代谢与HBV可能存在密切的联系。

     

  • 图  1  各组细胞干预前后生长情况(×40)

    图  2  GCS活性与HBV DNA相关性

    表  1  各时间点HBV感染细胞胞浆中HBsAg和HBV DNA的表达量

    时间 HBsAg(COI) HBV DNA(IU/ml)
    感染前 <1 0
    感染4 h 19.99±2.14 16.67±11.55
    感染8 h 25.31±7.06 112.01±25.94
    感染2 d 43.35±16.63 328.01±103.50
    感染5 d 17.20±6.64 101.60±49.84
    F 9.60 18.32
    P 0.001 9 <0.001
    下载: 导出CSV

    表  2  GCS在HBV感染期间的活性变化

    分组 GCS(IU/ml)
    对照组 136.50±15.44
    感染组
      感染4 h 126.21±9.59
      感染8 h 167.40±23.62
      感染2 d 226.53±36.27
      感染5 d 108.60±17.83
    下载: 导出CSV
  • [1] OMATA M, KANDA T, WEI L, et al. APASL consensus statements and recommendation on treatment of hepatitis C[J]. Hepatol Int, 2016, 10(5): 702-726. DOI: 10.1007/s12072-016-9717-6.
    [2] XU ZH, LIU Y, XU DP. Advances in novel anti-HBV agents acting on different targets[J]. Infect Dis Info, 2015, 28(5): 257- 261, 283. DOI: 10.3969/j.issn.1007-8134.2015.05.001.

    许智慧, 刘妍, 徐东平. 针对不同靶点的抗HBV新药研究进展[J]. 传染病信息, 2015, 28(5): 257-261, 283. DOI: 10.3969/j.issn.1007-8134.2015.05.001.
    [3] de MARTEL C, GEORGES D, BRAY F, et al. Global burden of cancer attributable to infections in 2018: A worldwide incidence analysis[J]. Lancet Glob Health, 2020, 8(2): e180-e190. DOI: 10.1016/S2214-109X(19)30488-7.
    [4] SU Y, ZHU YF, TIAN QY, et al. In vitro cell model and mouse model of HBV cccDNA[J]. J Clin Hepatol, 2019, 35(6): 1205- 1211. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2019.06.007.

    苏瑜, 朱园飞, 田青右, 等. HBV cccDNA的体外细胞模型和实验小鼠模型[J]. 临床肝胆病杂志, 2019, 35(6): 1205-1211. DOI: 10.3969/j.issn.1001-5256.2019.06.007.
    [5] NOORDEEN F, SCOUGALL CA, GROSSE A, et al. Therapeutic antiviral effect of the nucleic acid polymer REP 2055 against persistent duck hepatitis B virus infection[J]. PLoS One, 2015, 10(11): e0140909. DOI: 10.1371/journal.pone.0140909.
    [6] FLETCHER SP, CHIN DJ, GRUENBAUM L, et al. Intrahepatic transcriptional signature associated with response to interferon-α treatment in the woodchuck model of chronic hepatitis B[J]. PLoS Pathog, 2015, 11(9): e1005103. DOI: 10.1371/journal.ppat.1005103.
    [7] NI Y, LEMPP FA, MEHRLE S, et al. Hepatitis B and D viruses exploit sodium taurocholate co-transporting polypeptide for species-specific entry into hepatocytes[J]. Gastroenterology, 2014, 146(4): 1070-1083. DOI: 10.1053/j.gastro.2013.12.024.
    [8] HANNUN YA, OBEID LM. Sphingolipids and their metabolism in physiology and disease[J]. Nat Rev Mol Cell Biol, 2018, 19(3): 175-191. DOI: 10.1038/nrm.2017.107.
    [9] LIU YY, HILL RA, LI YT. Ceramide glycosylation catalyzed by glucosylceramide synthase and cancer drug resistance[J]. Adv Cancer Res, 2013, 117: 59-89. DOI: 10.1016/B978-0-12-394274-6.00003-0.
    [10] LI JF, ZHENG SJ, LIU S, et al. Impact of UGCG siRNA on 7702 hepatocyte proliferation in vitro[J]. J Pract Hepatol, 2018, 21(5): 697-700. DOI: 10.3969/j.issn.1672-5069.2018.05.011.

    李俊峰, 郑素军, 刘霜, 等. 葡萄糖神经酰胺葡萄糖基转移酶siRNA对7702肝细胞增殖的影响及机制研究[J]. 实用肝脏病杂志, 2018, 21(5): 697-700. DOI: 10.3969/j.issn.1672-5069.2018.05.011.
    [11] WEGNER MS, GRUBER L, MATTJUS P, et al. The UDP-glucose ceramide glycosyltransferase (UGCG) and the link to multidrug resistance protein 1 (MDR1)[J]. BMC Cancer, 2018, 18(1): 153. DOI: 10.1186/s12885-018-4084-4.
    [12] WANG T, WEI J, WANG N, et al. The glucosylceramide synthase inhibitor PDMP sensitizes pancreatic cancer cells to MEK/ERK inhibitor AZD-6244[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2015, 456(3): 821-826. DOI: 10.1016/j.bbrc.2014.12.019.
    [13] FAVRE D, PETIT MA, TRÉPO C. Latent hepatitis B virus (HBV) infection and HBV DNA integration is associated with further transformation of hepatoma cells in vitro[J]. ALTEX, 2003, 20(3): 131-142.
    [14] ZHONG G, YAN H, WANG H, et al. Sodium taurocholate cotransporting polypeptide mediates woolly monkey hepatitis B virus infection of Tupaia hepatocytes[J]. J Virol, 2013, 87(12): 7176-7184. DOI: 10.1128/JVI.03533-12.
    [15] CHOI BH, PARK CJ, RHO HM. Insulin activates the hepatitis B virus X gene through the activating protein-1 binding site in HepG2 cells[J]. DNA Cell Biol, 1998, 17(11): 951-956. DOI: 10.1089/dna.1998.17.951.
    [16] ZHENG SJ, QU F, LI JF, et al. Serum sphingomyelin has potential to reflect hepatic injury in chronic hepatitis B virus infection[J]. Int J Infect Dis, 2015, 33: 149-155. DOI: 10.1016/j.ijid.2015.01.020.
    [17] ZHANG JY, QU F, LI JF, et al. Up-regulation of plasma hexosylceramide (d18: 1/18: 1) contributes to genotype 2 virus replication in chronic hepatitis C: A 20-year cohort study[J]. Medicine (Baltimore), 2016, 95(23): e3773. DOI: 10.1097/MD.0000000000003773.
    [18] WERR M, PRANGE R. Role for calnexin and N-linked glycosylation in the assembly and secretion of hepatitis B virus middle envelope protein particles[J]. J Virol, 1998, 72(1): 778-782. DOI: 10.1128/JVI.72.1.778-782.1998.
    [19] XU J, ZHAO W, SUN J, et al. Novel glucosylceramide synthase inhibitor based prodrug copolymer micelles for delivery of anticancer agents[J]. J Control Release, 2018, 288: 212-226. DOI: 10.1016/j.jconrel.2018.09.011.
    [20] LEVERY SB, MOMANY M, LINDSEY R, et al. Disruption of the glucosylceramide biosynthetic pathway in Aspergillus nidulans and Aspergillus fumigatus by inhibitors of UDP-Glc: Ceramide glucosyltransferase strongly affects spore germination, cell cycle, and hyphal growth[J]. FEBS Lett, 2002, 525(1-3): 59-64. DOI: 10.1016/s0014-5793(02)03067-3.
  • 加载中
图(2) / 表(2)
计量
  • 文章访问数:  369
  • HTML全文浏览量:  123
  • PDF下载量:  22
  • 被引次数: 0
出版历程
  • 收稿日期:  2020-09-15
  • 录用日期:  2020-10-21
  • 出版日期:  2021-04-20
  • 分享
  • 用微信扫码二维码

    分享至好友和朋友圈

目录

    /

    返回文章
    返回